粗吻海龙蛋白组分的提取分离及体外抗肿瘤活性研究
Studies on the Anti-Tumor Effects of Proteins from Trachyrhamphus Serratus in Vitro
近年来,中药中的蛋白、多肽组分已被证明具有广泛的药理活性,从中发现具有抗肿瘤、增强免疫、调节免疫的蛋白、多肽已成为抗肿瘤新药研究的一个重要方向.本文在前期研究的基础上,对粗吻海龙的水溶性蛋白提取、分离及抗肿瘤活性进行了研究.首先,分离得到了粗吻海龙水溶性蛋白组分(HCP),应用MTT法检测其细胞毒效应.经研究发现:经0.008、0.04、0.2、1、5 mg/ml梯度浓度HCP处理48 h后,L1210、CCRF-CEM、A549、LOVO细胞的生长均被抑制,且呈现良好的量效关系,说明HCP具有明显的抗肿瘤活性.其次,应用流式细胞术等技术观察粗吻海龙粗蛋白对A549肿瘤细胞凋亡过程的诱导.HCP作用24h后,荧光显微镜观察到,A549细胞细胞核皱缩,呈强致密荧光;A549细胞DNA琼脂糖电泳图上出现梯形条带;流式细胞仪直方图出现亚二倍体峰.结果均显示HCP对A549细胞作用表现出凋亡细胞特征性的改变.最后,采用活性追踪的方法,对HCP进行了进一步纯化.通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、Superdex 75 prep grade凝胶过滤层析,采用MTT染色法观察各组分的抗肿瘤活性,从HCP中得到了活性蛋白S1.并通过SDS-PAGE电泳、等电聚焦、RP-HPLC等实验对其性质进行了研究.结果表明S1的分子量为58.3 kDa,等电点为4.4,对L1210、CCRF-CEM、A549细胞作用IC50分别为0.44±0.04 mg/ml、0.28±0.09 mg/ml、0.32±0.06 mg/ml,为粗吻海龙抗肿瘤的主要成分.
- 作者：
- 何芬
- 学位授予单位：
- 上海交通大学
- 专业名称：
- 微生物与生化药学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2007年
- 导师姓名：
- 李晓波
- 中图分类号：
- R284；R73-3
- 关键词：
- 粗吻海龙；肿瘤；凋亡；蛋白质；纯化
- Trachyrhamphus serratus； Anti-tumor； Apoptosis； Protein； Purification