成纤维细胞在慢阻肺气道重塑中的作用及中药干预的研究
目的:本课题旨在利用粉防己碱作用于人胚肺成纤维细胞,通过研究对炎症及非炎症刺激后成纤维细胞的分子生物学的变化来评价粉防己碱对气道重塑的作用并探讨其作用机制,为粉防己碱在临床应用提供理论依据.方法:体外培养人胚肺成纤维细胞8-10代用于实验.不同浓度的脂多糖与粉防己碱作用于成纤维细胞中,运用MTT法测定细胞生长活力、生长曲线、ELISA法测定细胞培养上清液中的TGF-β1,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.结果:(1)成纤维细胞细胞活性的测定(MTT方法):通过诱导24小时后得出:正常组0.344±0.004,高浓度粉防己碱组为0.235±0.021,抑制率为31.7%;中浓度粉防己碱组为0.291±0.045,抑制率为15.4%;低浓度粉防己碱组为0.311±0.146,抑制率为9.6%,有统计学意义(P<0.05).正常细胞组0.486±0.064,10ng/ml脂多糖组0.460±0.037,100ng/ml脂多糖组0.448±0.033,1μg/ml脂多糖组0.497±0.065,10μg/ml脂多糖组0.430±0.025,没有显著意义(P>0.05).(2)粉防己碱对成纤维细胞细胞周期的测定(流式细胞仪检测法):通过诱导人胚肺成纤维细胞24小时后统计S期得到:正常组43.87±1.324,高浓度粉防己碱组为25.93±1.288,低浓度粉防己碱组为38.91±1.429,有统计学意义(P<0.05),而高浓度脂多糖组为46.67±1.76,没有显著性差异(P>0.05).(3)粉防己碱对成纤维细胞细胞凋亡的测定(流式细胞仪检测法):通过诱导细胞24小时后得出:正常组为5.00±0.265,高浓度粉防己碱组为23.7±1.153,低浓度粉防己碱组为17.13±1.168,有统计学意义(P<0.05).(4)粉防己碱对成纤维细胞TGF-β1表达的影响(ELISA法):通过诱导人胚肺成纤维细胞24小时后测定上清液得出:正常组为0.348±0.001,高浓度粉防己碱组为0.222±0.007,中浓度粉防己碱组为0.239±0.013,低浓度粉防己碱组为0.282±0.070,有统计学意义(P<0.05).通过高浓度粉防己碱诱导细胞六天得出:第一天为0222±0.007,第二天为0.213±0.001,第三天为0.201±0.007,第四天为0.197±0.008,第五天为0.196±0.017,第六天为0.191±0.001,没有统计学意义(P>0.05).结论:(1)粉防己碱对人胚肺成纤维细胞的增生有明显抑制生长作用,且随着浓度的增加抑制作用越明显;(2)粉防己碱对人胚肺成纤维细胞的细胞周期有明显的抑制作用,随着浓度的增加抑制作用越明显;(3)粉防己碱能促进人胚肺成纤维细胞的凋亡,随着浓度的增加凋亡率也在增高;(4)粉防己碱能抑制人胚肺成纤维细胞的TGF-β1的表达,浓度越大抑制作用越明显,但与时间无明显规律性本结果提示:粉防己碱对气道重塑有抑制作用,其机理从细胞层面来看是通过抑制成纤维细胞的生长、细胞周期、促进其凋亡、抑制TGF-β1的表达而发挥作用的.
- 作者：
- 吴楠
- 学位授予单位：
- 南京中医药大学
- 专业名称：
- 中西医结合临床呼吸
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2007年
- 导师姓名：
- 周玉皆
- 中图分类号：
- R563.9；R285.5
- 关键词：
- 粉防己碱；人胚肺成纤维细胞；慢性阻塞性肺疾病；气道重塑；脂多糖；TGF-β1；细胞周期；细胞凋亡
- Tetrandrine； Human Embryonic lung Fibroblast； Chronic obstructive pul monary disease； Remodeling of the airway； Lipopolysaccharide； Transforming growth factor beta； the apoptosis of HELF； the cycle of HELF