通络冻干粉针在动物体内的药代动力学及体内过程研究
Study on the Pharmacokinetics and Disposion of Tongluo Freeze-Dried Powder Injection in Dogs and Rats

中药复方是中医治病的主要临床应用形式,研究中药复方的药动学规律,可以阐明和完善中药复方组方原理及其作用机制,为提高中药复方制剂质量和优化给药方案提供科学依据.通络冻干粉针主要由栀子、芍药等几味中药组成,具有活血化淤、泻火利湿、清热解毒的功效,临床上主要用于治疗冠心病、动脉粥样硬化等疾病,其中的主要有效成分为栀子苷和芍药苷.本文以通络冻干粉针为研究对象,建立了Beagle犬、大鼠体内生物样品中栀子苷和芍药苷灵敏而专属的HPLC定量分析方法,研究了栀子苷和芍药苷在大鼠体内的分布、排泄的过程;并且初步探索了通络冻干粉针在脑组织和脑脊液中的分布情况,结果表明栀子苷和芍药苷iv给药后均能透过血脑屏障.主要研究内容包括以下四个方面:一.iv给药通络冻干粉针在Beagle犬体内的药代动力学研究建立了同时测定Beagle犬血浆中栀子苷和芍药苷的HPLC定量分析方法,为进一步研究通络冻干粉针的药代动力学提供了可靠的方法.Beagle犬血浆以甲醇提取并沉蛋白除去杂质,N2吹干流动相复溶后,以RP-HPLC法测定Beagle犬血浆中栀子苷和芍药苷浓度.优化的色谱条件为:Kromasil C18柱为色谱柱,甲醇-水(21:79)为流动相,检测波长:230nm,流速:1mL/min,柱温:30℃,栀子苷与芍药苷分离度佳,内源性物质不干扰样品测定.栀子苷浓度在1.047~1047.0μg/mL的范围内,峰面积与血浆浓度间呈良好的线性关系良好(r=0.9999),提取回收率高于80%,最低检测限为20.49ng/mL,日内和日间精密度RSD均小于10%;芍药苷浓度在1.001-1001.0μg/mL的范围内,峰面积与血浆浓度间呈良好的线性关系良好(r=0.9999),提取回收率高于70%,最低检测限为20.02ng/mL,日内和日间精密度RSD均小于10%.此方法具有灵敏、专一的特点,符合生物样品的分析要求.本文选用12只Beagle犬以高、中、低3个剂量(12g生药/kg、6g生药/kg、3g生药/kg)分别单剂量静注给药,三个剂量的栀子苷和芍药苷血药浓度-时间曲线符合一级吸收的二室模型,栀子苷平均消除半衰期(t1/2β)为148.6min,芍药苷平均消除半衰期(t1/2β)为164.1min,达峰时间均为2min.以2只Beagle犬为一组实验对象,单剂量(12g生药/kg)灌胃给药(ig)通络冻干粉针,结果表明在血浆中未检测到栀子苷原形药物;芍药苷在犬血浆中能够得到其原形物,在犬体内过程符合一级吸收的二室模型,消除半衰期(t1/2β)为253.8min,达峰时间为60min,AUC为9498.3 minμg/ml,绝对生物利用度为22.55%.二.通络冻干粉针在大鼠体内的药代动力学研究建立了大鼠血浆中同时测定栀子苷和芍药苷的分析方法,栀子苷在0.502~1004.0μg/mL的范围内,峰面积与血浆浓度间呈良好的线性关系(r=0.9997),提取回收率高于70%,最低检测限为25.10ng/mL,日内精密度RSD均小于10%;芍药苷浓度在0.958~958.0μg/mL的范围内,峰面积与血浆浓度间呈良好的线性关系良好(r=0.9999),提取回收率高于60%,最低检测限为23.95ng/mL,日内精密度RSD均小于10%.此方法具有灵敏、专一的特点,符合生物样品的分析要求.本文选用5只大鼠单剂量(21.6g生药/kg)静注(i.v.)给药通络冻干粉针后,大鼠体内血药浓度-时间曲线符合二室模型,栀子苷和芍药苷在大鼠体内5min达到峰值;消除半衰期(t1/2β):栀子苷75.67min,芍药苷为65.89min;栀子苷与芍药苷在大鼠体内的消除过程比较接近.三.通络冻干粉针在大鼠体内的排泄研究建立了大鼠尿液、胆汁中同时测定栀子苷和芍药苷的分析方法,并进行了方法学考察.大鼠单剂量iv给药(21.6g生药/kg)后,不同的时间收集的尿液和胆汁中均能检测出栀子苷和芍药苷的原形药物,以尿液中的排出量较大,48h内栀子苷原形药物累计排出量为34.5%,芍药苷为18.6%;胆汁中48h内栀子苷原形药物累计排出量为0.817%,芍药苷为3.17%.四.通络冻干粉针在脑组织及脑脊液中的分布研究本文探索了单剂量iv给药后大鼠脑组织和脑脊液中栀子苷和芍药苷的分布情况,在脑组织和脑脊液中均能检测到栀子苷和芍药苷的原形药物,表明通络冻干粉针能够透过血脑屏障,在一定程度上说明了通络冻干粉针对于治疗心脑血管疾病的作用机制.本文以RP-HPLC法建立了同时测定Beagle犬、SD大鼠血浆中栀子苷和芍药苷含量的定量分析方法,该方法灵敏度高、专属性强.本文采用通络冻干粉针iv给药后研究栀子苷和芍药苷在脑组织和脑脊液中的分布情况,表明栀子苷和芍药苷能够透过血脑屏障,进入脑部,以期阐明其治疗心血管疾病的作用机理.