胃癌与癌旁组织miRNA差异表达谱芯片实验及miRNA多态性与胃癌的关系研究
第一部分
胃癌miRNAs差异表达谱芯片研究
目的:采用miRNAs表达谱微阵列芯片筛选胃癌与癌旁组织的差异miRNAs.
方法:收集到48例胃癌与癌旁组织样本,放入液氮中保存,用于RNA提取.选取胃癌样本及其配对癌旁样本10例,使用人类TheIllumina(R)MicroRNAExpressionProfilingAssay微阵列芯片分析胃癌与癌旁正常胃黏膜组织miRNAs差异表达谱.选择芯片结果中下调最显著的miR-30c,应用Real-timePCR验证在35对配对样本即胃癌组织与癌旁远端组织中的差异表达量.用SPSS13.0软件统计分析miR-30c的差异表达量与临床病理因素的关系.并对感兴趣的差异miRNAs调控的靶标和参与的信号通路做了预测分析.
结果:MiRNAs表达谱微阵列芯片筛选出一系列表达升高或者降低的miRNAs,其中胃癌组织中miRNAs表达水平上调超过两倍且P<0.05的有五个(HS100,has-miR-27a,has-miR-214*,solexa-555-1991,has-miR-196),表达水平下调超过两倍且P<0.05的有11个(has-miR-502-3p,has-miR-29c*,has-miR-64,has-miR-193b,has-miR-551b,has-miR-30c,has-miR-582-5p,has-miR-625*,has-miR-660,has-miR-363,has-miR-486-5p).Real-timePCR实验显示miR-30c在胃癌组织与癌旁远端组织的差异表达趋势与芯片中的结果一致.miR-30c表达下调水平与胃癌有淋巴结转移组相关(p=0.006).
结论:miR-30c表达下调可能与胃癌的发生、发展过程有关,可能成为胃癌潜在的早期诊断和治疗新靶点.我们还需要更多的胃癌组织样本对miR-30c表达进行验证,明确其异常表达是否与某一特殊类型胃癌病理因素存在必然联系.
第二部分
pre-miR-30c多态性与中国人群胃癌易感性的研究
目的:探讨pre-miR-30cA/G单核苷酸多态性与胃癌患病风险的关系及对患者预后的影响.
方法:以病例-对照的方法开展研究.收集了附属医院2006年到2011年的240例胃癌样本以及年龄性别与之相匹配的对照样本.应用TaqMan探针法对pre-miR-30c的多态位点rs928508进行了基因分型.在48例胃癌样本中应用实时定量聚合酶链反应,对成熟miR-30c进行了相对表达量的检测.Kaplan-Meier生存曲线进行预后分析.
结果:pre-miR-30cA/G的基因型频率在胃癌患者中与对照组间存在差异(P=0.022).携带AA基因型较GG基因型增加胃癌的患病风险(调整后的风险比OR=1.83,95%置信区间(95%CI):1.07-3.15,P=0.029.)年龄>60岁的老年个体,男性,不吸烟者和幽门螺旋菌感染者患胃癌的风险较高(调整后的风险比,95%的置信区间,P值分别为OR=2.66,95%CI:1.38-5.13,P=0.004;OR=1.90,95%CI:1.10-3.27,P=0.022;OR=1.94,95%CI:1.12-3.35,P=0.018;OR=1.83,95%CI:1.08-3.10,P=0.024).进一步的分层分析显示AA基因型与胃癌的淋巴结转移相关(调整后的风险比OR=2.23,95%CI:1.07-4.64,P=0.032).相对表达量分析显示,rs928508AA基因型与GG或者AG/GG比较可以提高成熟体miR-30c的表达水平(P=0.011或P=0.013).拥有AA基因型相比较拥有AG/GG基因型提示预后不良(Logrank5.848,P=0.016).
结论:pre-miR-30cA/G多态性可能通过改变成熟体miR-30c的表达水平而增加胃癌的患病风险.Pre-miR-30cA/G多态性将会成为胃癌诊断与预后的新型标志物.
- 作者：
- 牟永平
- 学位授予单位：
- 首都医科大学
- 专业名称：
- 细胞生物学
- 授予学位：
- 博士
- 学位年度：
- 2012年
- 导师姓名：
- 苏秀兰
- 关键词：
- 胃癌；遗传易感性；预后因素；癌旁组织；miRNA多态性
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