VEGF--C/VEGFR--3对口腔黏膜恶性黑色素瘤生物学行为的影响
口腔黏膜恶性黑色素瘤是发生于口腔颌面部的一种少见、但恶性程度极高的肿瘤,发病构成比仅占口腔恶性肿瘤的0.5%,5年存活率仅20%左右.口腔黏膜恶性黑色素瘤与皮肤恶性黑色素瘤有着不同的病因和发病机制,目前针对口腔黏膜恶性黑色素瘤的研究很少.颈淋巴道转移是口腔黏膜恶性黑色素瘤重要的预后指标之一,因而阐明口腔黏膜恶性黑色素瘤颈淋巴转移的机制将有助于口腔黏膜恶性黑色素瘤患者的诊断和治疗.
血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)是VEGF基因家族一员,通过结合其受体VEGFR-3,可以促进淋巴内皮细胞的增殖、侵袭等.口前发现VEGFR-3在许多肿瘤细胞上也有表达,肿瘤细胞可能通过自分泌或旁分泌VEGF-C,并结合自身受体VEGFR-3,调节肿瘤细胞增殖、侵袭、转移、药物敏感等能力.阻断肿瘤细胞VEGF-C/VEGFR-3通路可能为肿瘤的治疗提供新的靶点.但VEGF-C/VEGFR-3对口腔黏膜恶性黑色素瘤生物学行为的影响,目前国内外很少有报道.
目的:
观察VEGF-C/VEGFR-3对口腔黏膜恶性黑色素瘤生物学行为的影响,为口腔黏膜恶性黑色素瘤临床分子靶向治疗提供基础.
方法:
1、采用免疫组化技术观察VEGF-C、VEGFR-3在30例口腔黏膜恶性黑色素瘤临床样本的表达,并分析VEGF-C、VEGFR-3的表达与其临床病理、生存的关系.
2、运用Real Time PCR技术、Western blot技术、酶联免疫吸附(ELISA)技术研究VEGF-C、VEGFR-3在口腔黏膜恶性黑色素瘤细胞系ME细胞中的表达.
3、通过RNA干扰技术,建立VEGF-C低表达稳定转染的ME细胞株:运用Real TimePCR和联免疫吸附ELISA分析检测干扰后VEGF-C的表达.
4、采用MTT、流式细胞仪、Transwell侵袭实验、免疫组织化学和动物皮下接种成瘤实验研究VEGF-C RNA干扰后对口腔黏膜恶性黑色素瘤细胞的增殖、侵袭、药物(顺铂)敏感性以及成瘤能力的影响.
结果:
1、VEGF-C/VEGFR-3在口腔黏膜恶性黑色素瘤临床样本有表达,VEGF-C高表达为45.5%,VEGFR-3高表达率为20%,VEGF-C高表达与淋巴道转移相关(P<0.05),但VEGF-C、VEGFR-3的表达与临床生存率无关性.
2、ME细胞中VEGF-C、VEGFR-3的mRNA水平和蛋白水平均有表达,尤其是VEGF-C的表达,在mRNA水平为阳性对照舌鳞癌细胞系Tca8113、TL细胞的45倍,蛋白水平为其3倍.
3、限制性内切酶酶切和DNA序列测定VEGF-C表达载体证实,目的片段己正确插入载体且插入片段序列正确.运用G418筛选获得稳定转染细胞株,经Real Time PCR和联免疫吸附ELISA分析表明,VEGF-C mRNA和蛋白表达水平出现了明显的敲减效应.
4、VEGF-C RNA干扰后的ME细胞增殖加速,S期细胞增多;Transwell侵袭实验显示VEGF-C RNA干扰后穿膜细胞数目下降30%,免疫组化显示MMP-2表达明显降低;VEGF-C RNA干扰后ME细胞对顺铂的IC50降低;在低浓度顺铂作用下,干扰后ME细胞抑瘤率增高一倍,细胞凋亡和坏死率明显增多;VEGF-C RNA干扰后ME细胞皮下成瘤时间缩短,肿瘤生长加速,肿瘤向周围组织侵袋能力减弱.
结论:
1、VEGF-C、VEGFR-3在口腔黏膜恶性黑色素瘤中有表达,VEGF-C的表达与口腔黏膜恶性黑色素瘤淋巴道转移相关.
2、VEGF-C在口腔黏膜恶性黑色素瘤细胞系(ME细胞)高表达.
3、VEGF-C RNA干扰可促进口腔黏膜恶性黑色素瘤的增殖、降低其侵袭能力、增强其对顺铂的敏感性、提高体内成瘤能力.
- 作者：
- 武和明
- 学位授予单位：
- 上海交通大学
- 专业名称：
- 口腔临床医学(口腔颌面外科)
- 授予学位：
- 博士
- 学位年度：
- 2009年
- 导师姓名：
- 郭伟
- 关键词：
- VEGF基因；口腔黏膜恶性黑色素瘤；RNA干扰；生物学行为；药物敏感性
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