ADMA对肝星状细胞活化及信号通路的实验研究
Study of the Effect of ADMA on Hepatic Stellate Cells Proliferation and Its Possible Signal Pathway
目的:观察非对称性二甲基精氨酸对肝星状细胞增殖活化的影响及可能涉及的信号传导通路.
方法:体外培养HSC-T6细胞,取对数生长期细胞进行实验,分组培养.予不同浓度的ADMA及P38MAPK阻断剂(SB203580)处理HSC,应用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;通过MTT法检测药物对细胞增殖的影响;应用RT-PCR法检测药物作用后P38MAPK、TGF-β1、Ⅰ型胶原mRNA表达水平的变化;通过ELISA法检测各实验组Ⅰ型胶原蛋白的表达变化.
结果:1、通过镜下观察细胞形态变化显示:随着ADMA浓度的增加,细胞体积逐渐增大,较对照组伸展更明显,生长状态良好.2、MTT实验表明:ADMA呈浓度-时间依赖性促进HSC增殖,在ADMA(10μmol/l)、作用48h时细胞增殖率最高;SB203580可抑制HSC增殖,随着SB203580浓度增加,HSC增殖抑制率逐渐增加.3、RT-PCR实验结果显示:ADMA呈浓度依赖性上调P38MAPK、TGF-β1、Ⅰ型胶原mRNA表达;而SB203580则使P38MAPK、TGF-β1、Ⅰ型胶原mRNA表达水平下降.4、ELISA实验表明随着ADMA浓度增加,Ⅰ型胶原蛋白表达逐渐增多;SB203580则呈浓度依赖性降低Ⅰ型胶原蛋白表达.
结论:ADMA促进HSC增殖活化进一步促进ECM的增多,可能与激活P38MAPK信号通路,上调TGF-β1表达,增加胶原合成有关;SB203580能抑制HSC增殖、P38MAPK信号传导通路及TGF-β1表达,减少胶原合成.
- 作者：
- 赵娜
- 学位授予单位：
- 遵义医学院
- 专业名称：
- 内科学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2012年
- 导师姓名：
- 刘春英
- 中图分类号：
- R575.2
- 关键词：
- 非对称性二甲基精氨酸；P38MAPK阻断剂；肝星状细胞；细胞活化；信号通路
- Asymmetric dimethy larginine(ADMA)；P38-mitogen-activated proteinkinase inhibitor(SB203580)；hepatic stellate cells(HSC)；Activation；Signal pathway