羊脑多头蚴组织结构观察与Tm18基因的克隆
Observation on the Structure of Coenarus Cerebralis of Taenia Multiceps and Cloning of Tm18
采集自然感染的羊脑多头蚴,在其头节﹑外周囊壁﹑头节附近颈部区囊壁三个部位取材,分别制成组织切片和超薄切片.组织切片用HE法染色后进行光镜观察.结果表明:头节外壁和囊壁外壁结构差别较大;组成吸盘的肌肉组织呈放射状分布,条状分布的肌肉样组织中有空泡和一些颗粒样物质分布,表面可见大量微绒毛,头节可根据结构的巨大差异可以分为吸盘﹑顶突﹑体囊和体腔四部分.囊壁可分为两层,外层为角质层,内层为生发层,大约有200个头节生长在囊壁生发层上.超薄切片经醋酸双氧铀染色后进行透射电镜观察.结果表明:囊壁可明显分为皮层、间质层和实质区.在实质区可见到皮层细胞、实质细胞、成石灰小体细胞、焰细胞、成肌细胞以及排泄系统结构;头节中可见到很发达的肌纤维结构,头节内部有类似于囊壁皮层结构,并可见粗大微毛,但细胞种类明显少于囊壁实质区,含颗粒的囊泡结构明显增多.证明羊脑多头蚴囊壁的结构和细胞种类与其它绦虫相似,并有比较发达的排泄系统.头节与其它绦虫相比数量很多,体积很小,头节边缘无皮层结构,头节连接处含有的肌纤维与其它绦虫相比不发达.采集自然感染绵羊的脑多头蚴,饲喂犬建立动物模型,收集孕卵节片,虫卵经次氯酸钠法破壳,人工肠液激活六钩蚴,提取总RNA.设计特异引物,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),从多头带绦虫六钩蚴RNA扩增Tm18基因,将扩增产物重组于原核表达载体pGEX-4T-1,构建pGEX-4T-Tm18重组质粒,转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达融合蛋白.表达产物经纯化后进行Western-blot分析证明,所表达的重组蛋白和自然感染羊脑多头蚴血清纯化的IgG有良好的反应原性,可以作为羊脑多头蚴病疫苗研制的候选抗原.
- 作者：
- 张小宇
- 学位授予单位：
- 甘肃农业大学
- 专业名称：
- 预防兽医学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2012年
- 导师姓名：
- 孙晓林
- 中图分类号：
- S858.26
- 关键词：
- 羊脑多头蚴；组织结构；超微结构；Tm18；表达
- Coenurus cerebralis；Organization structure；Ultrastructural；Tm18；Express