基于稳定同位素标记吉拉德试剂P的还原性寡糖相对定量分析法
Stable Isotope Labels Girard's Reagent P for Relative Quantitation of Reductive Glycans by Electrospray Ionization Mass Spectrometry
糖基化是蛋白质后修饰最重要的方式之一,50%以上的蛋白具有糖基化现象.目前的研究表明,如果糖基化修饰出现缺陷,就会发生先天性糖基化缺陷疾病(CDG),许多恶性肿瘤组织与正常组织相比显示出蛋白质糖基化的明显差异.因此,糖类物质是重要的生物标志物,可为重大恶性疾病的早期诊断带来希望.近年来,生物质谱已成为生物大分子的重要研究手段,而稳定同位素标记的方法成为差异糖组学的重要分析方法.本文建立了一种基于吉拉德试剂P(Girard's reagent P,GP)衍生化的do/d5稳定同位素标记-电喷雾电离质谱相对定量分析还原性寡糖链的方法.吉拉德试剂衍生试剂因自身带有正电荷,衍生后使被测物质也带有永久正电荷,在质谱检测时主要形成[M]+离子,避免了其它衍生试剂在质谱检测中随机出现的[M+H]+[M+Na]+和[M+K]+等多种金属加合离子峰并存的现象,检测灵敏度提高的同时,使质谱图变得简单.do/d5-GP试剂标记的糖链等摩尔比混合后,在质谱图上出现质量数相差5Da的对峰,对峰中同位素衍生物之间质谱丰度的差异体现了两种来源样品中糖链在量上的差异.据此可以实现糖链的定性及相对定量分析.本研究通过对由PNGase F释放的鸡卵清白蛋白和Ribonuclease B中N-糖链的相对定量分析研究,验证了该方法具有10倍以内混合摩尔比的相对定量线性范围(R=0.9991)、良好的重复性(平均变异系数CV=3.8%)和较高的准确性(平均误差RE=11.6%).并将该方法应用于牛和猪IgG中N-糖链,不同哺乳期人乳中游离寡糖以及人血清样品中N-糖链的相对定量分析,表明该方法可以用于两种不同来源样品的糖组差异研究.
- 作者：
- 吴智宇
- 学位授予单位：
- 西北大学
- 专业名称：
- 中药学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2012年
- 导师姓名：
- 王仲孚
- 中图分类号：
- R284
- 关键词：
- 相对定量；电喷雾质谱；稳定同位素标记；Girard's reagent P
- ESI-MS；stable isotope labeling；Girard's reagent P；glycan
- 基金项目：
- 国家自然科学