仁术健胃颗粒对慢性萎缩性胃炎的实验研究
Experimental Study of Renzhu Jianwei Granules in Chronic Atrophic Gastritis

仁术健胃颗粒在临床上广泛用于慢性萎缩性胃炎(Chronic Atrophic Gastritis, CAG)的治疗,治疗效果很好.为了探讨仁术健胃颗粒治疗慢性萎缩性胃炎的作用机制,以便更好的服务临床治疗,为仁术健胃颗粒治疗CAG获得更满意的效果.依据临床上仁术健胃颗粒治疗CAG脾气虚证患者效果更优,本课题进行实验研究,建立CAG脾气虚证大鼠模型,给予仁术健胃颗粒治疗CAG脾气虚证大鼠模型,观察仁术健胃颗粒对CAG脾气虚证的药效学作用.为了进一步探讨仁术健胃颗粒的治疗CAG癌前病变,培养胃癌细胞,研究仁术健胃颗粒兔含药血清对N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-Methyl-N-nitroso-N'-nitroguanidine, MNNG)致人胚胃粘膜上皮细胞恶性转化细胞即MC的增殖、凋亡以及P16、Fas、Survivin表达的影响.第一部分使用MNNG和酒精,配合饥饱失常、破气苦降、疲劳耗气的多因素方法建立CAG脾气虚证大鼠模型,观察多因素造模方法对CAG脾气虚证大鼠体重、体温,脾脏指数,胃指数和胃部组织病理的影响,评价CAG脾气虚证大鼠模型.结果:CAG脾气虚证大鼠模型体重明显低于正常组,存在显著性差异(p﹤0.01); CAG脾气虚证大鼠模型体重增长率也明显低于正常组,存在显著性差异(p﹤0.01).CAG脾气虚证大鼠模型脾脏重量低于正常组,存在显著性差异(p﹤0.01); CAG脾气虚证大鼠模型胃指数高于正常组,存在显著性差异(p<0.01).多因素造模的方法会使大鼠体温产生较大波动.CAG脾气虚证大鼠模型胃部组织的病理改变如腺体数量,炎细胞浸润,腺体肠化,粘膜糜烂,及溃疡形成等的积分数高于正常组,存在显著性差异(p<0.01).提示:MNNG和酒精,配合饥饱失常、破气苦降、疲劳耗气的方法建立CAG脾气虚证大鼠模型,会造成大鼠机体多方面的改变和损伤,其中以胃部组织的病理改变,最能客观表现CAG脾气虚证大鼠模型的成功建立.第二部分给予CAG脾气虚证大鼠模型仁术健胃颗粒进行治疗,观察大鼠胃粘膜破坏因子如内皮素(ET),一氧化氮合酶(NOS),胃动素(MTL)的变化,胃粘膜保护因子如胃泌素(GAS),生长抑素(SS),分泌型免疫球蛋白(SIgA)的变化,以及胃部环氧合酶2(COX-2),基质金属蛋白酶2(MMP-2)和表皮生长因子受体(EGFR)的表达,探讨仁术健胃颗粒对如上因子的影响.结果:(1)CAG脾气虚证模型组的ET、NOS、MTL水平高于正常组,存在显著性差异(p<0.05);仁术健胃颗粒12g/kg剂量组的ET水平低于CAG脾气虚证模型组,存在显著性差异(p<0.05);仁术健胃颗粒6g/kg和3g/kg剂量组的NOS的水平低于CAG脾气虚证模型组,存在显著性差异(p<0.05);仁术健胃颗粒12g/kg和6g/kg剂量组的MTL的水平低于CAG脾气虚证模型组,存在显著性差异(p<0.05).提示:仁术健胃颗粒的治疗,可以降低CAG脾气虚证模型异常升高的胃粘膜破坏因子ET、NOS、MTL水平,使其接近或恢复正常水平.(2)CAG脾气虚证大鼠模型GAS, SS和SIgA水平比正常组低,存在显著性差异(p<0.05).仁术健胃颗粒12g/kg,6g/kg,3g/kg剂量组的GAS水平均比CAG脾气虚模型组高,存在显著性差异(p<0.05).仁术健胃颗粒仅12g/kg剂量组SS水平比CAG脾气虚模型组高,存在显著性差异(p<0.05).仁术健胃颗粒6g/kg,3g/kg剂量组的SIgA水平比CAG脾气虚模型组高,存在显著性差异(p<0.05).提示:仁术健胃颗粒的治疗,能提高CAG脾气虚证模型异常降低的胃粘膜保护因子GAS、SS、SIgA水平,使其接近或恢复正常水平.(3)CAG脾气虚证大鼠模型的COX-2、MMP-2、EGFR表达均处于较高水平.仁术健胃颗粒12g/kg,6g/kg,3g/kg剂量组均可以降低COX-2、MMP-2、EGFR的表达,与CAG脾气虚证大鼠模型组比较,存在显著性差异(p<0.05).提示:仁术健胃颗粒的治疗,可以降低CAG脾气虚证模型胃部组织COX-2、MMP-2和EGFR的表达.第三部分培养人胚胃粘膜上皮细胞恶性转化的细胞即MC,探讨仁术健胃颗粒兔含药血清的对MC的增殖和P16的表达影响,以及对MC的凋亡和Fas、survivin表达的影响.结果:仁术健胃颗粒高、中、低剂量组和维甲酸组MC的增殖数量低于生理盐水组,存在显著性差异(P<0.05);仁术健胃颗粒高、中、低剂量组和维甲酸组MC的P16蛋白表达高于生理盐水组,存在显著性差异(P<0.05).仁术健胃颗粒高、中、低剂量组和维甲酸组MC的凋亡率高于生理盐水组,在在显著性差异(P<0.05);仁术健胃颗粒高、中、低剂量组和维甲酸组MC的Fas蛋自表达高于生理盐水组,存在显著性差异(P<0.05);仁术健胃颗粒高、中、低剂量组和维甲酸组MC的Survivin蛋白表达高于生理盐水组,存在显著性差异(P<0.05).提示:仁术健胃颗粒含药血清可以抑制MC增殖,提高MC的凋亡,提高MC中P16的表达,提高Fas表达,降低Survivin表达.结论:通过对大鼠胃组织的病理学检查,可以判断使用多因素法可以成功建立CAG脾气虚证大鼠模型.仁术健胃颗粒可以调节CAG脾气虚证模型异常变化的胃粘膜破坏因子ET、NOS、MTL和胃粘膜护因子GAS、 SS、 SIgA接近或恢复到正常水平,减少COX-2、MMP-2、EGFR的表达,起到治疗和预防CAG的作用.仁术健胃颗粒可以抑制胃癌细胞的增殖,促进胃癌细胞的凋亡,其机制与提高胃癌细胞P16的表达,提高胃癌细胞Fas的表达,降低胃癌细胞Survivin有紧密联系.