酪蛋白磷酸肽的制备及其持钙能力的研究
Preparation of Casein Phosphopeptides and Studies on Its Calcium-holding Ability
酪蛋白磷酸肽(Casein Phosphopeptides,CPP)是以牛乳酪蛋白为原料,经单一酶或复合酶水解,再经分离纯化而得到的含磷酸丝氨酸簇的天然生理活性肽.它在pH呈中性至微碱性的动物小肠下段,能与Ca2+、Fe2+和Zn2+等金属离子结合,阻止金属离子与磷酸根产生沉淀,使小肠内可溶性的钙、铁和锌的浓度增加,从而促进这些必需金属离子的吸收和利用.本文以酪蛋白为原料制备CPP,对CPP的制备工艺及其持钙能力进行了研究.采用L9(34)正交实验,对碱性蛋白酶2709酶解酪蛋白制备酪蛋白肽的工艺进行优化,得到最佳酶解条件为:底物浓度5%,温度50℃,加酶量9000 U/g,pH 9.0,酶解时间3 h.在此条件下,酪蛋白水解度达到22.85%.采用钙-乙醇沉淀法从酪蛋白肽中分离出粗制CPP,考察了分离过程中影响CPP得率和氮/磷摩尔比(N/P)的因素,结果发现,随着水解度(DH)的升高,CPP的N/P随之降低.CPP的得率随pH的升高而升高,pH在5.5时N/P达到最大.随着酪蛋白肽溶液浓度的升高,CPP的N/P也随之升高,CPP的得率在酪蛋白肽溶液浓度为10%时达到最高.CPP的得率和N/P均随乙醇浓度和沉淀时间的增加而增加.采用001*7阳离子交换树脂和717阴离子交换树脂纯化CPP粗品获得精制CPP,考察了脱盐过程中影响氮回收率和脱盐率的因素,结果发现,肽液浓度5%,流速6 m/h,温度25℃为最佳脱盐条件,在此条件下,氮回收率达77.19%,脱盐率达78.93%.采用高效液相色谱法(HPLC)测定了精制CPP产品的分子量分布及氨基酸组成,结果发现,CPP分子量绝大多数分布在较小的分子量范围内,分子量在3000 Da以下的CPP分子占98.22%,其中,分子量分布在1000~500 Da和500~180 Da之间的CPP分子分别占23.29%和60.66%.采用体外模拟实验考察CPP的持钙能力,研究了影响CPP持钙能力的因素.结果发现,CPP的持钙能力随水解度的上升而增强;同时也随CPP添加量的增加和CPP纯度的提高而增强,精制CPP可使磷酸钙沉淀的形成推迟25~30 min.食品加工过程中的短时高温加热未对CPP的持钙能力造成太大影响;葡萄糖有加速磷酸钙沉淀的作用,而添加淀粉、苯甲酸钠和柠檬酸均可推迟磷酸钙沉淀的形成,其中柠檬酸的作用效果尤为明显.
- 作者：
- 徐曼
- 学位授予单位：
- 武汉工业学院
- 专业名称：
- 粮食、油脂及植物蛋白工程
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2011年
- 导师姓名：
- 何东平
- 中图分类号：
- TQ936.16
- 关键词：
- 酪蛋白磷酸肽；制备；持钙能力
- casein phosphopeptides；preparation；calcium-holding ability