药物遗传毒性筛检新方法的建立和初步验证
大肠杆菌宿主中介RECA/UVRB差异性DNA修复试验(E.COLI HMA-DDRT)是将一对DNA修复缺陷型及其野生型指示菌和受试物分别给予动物,检测宿主靶器官中两种指示菌的相对回收量,当受试物引起DNA修复缺陷型菌株较野生型表现差异性致死效应时,提示受试物在体内诱发了可修复的致死性DNA损伤.我们已首先在国内成功建立了体外试验,结果该方法与AMES试验、文献报道的同类试验以及动物致癌试验的符合率分别为65.7％、75％和77％. 本研究进一步建立了宿主中介试验方法.先以空白对照动物摸索给菌量、各器官指示菌回收方法、回收时间、回收量等实验条件,实验结果显示给菌后2H为最佳采样时间点,空白对照动物的肝、脾、肾、肺、血液等器官细菌回收量足够进行HMA-DDRT试验.设定相对存活率(Q VALUE OFRELATIVE SURVIVAL,QRS)判断受试物遗传毒性的量效关系,以差异性致死强度指数(DIFFERENTIAL KILLING INDEX,DKI)定量比较各种受试物的毒性强度.确定了稳定的试验条件,保证了方法的重复性和可靠性.通过比较烷化剂二甲基亚硝胺、甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯在体外液体悬浮试验和体内宿主中介试验中的遗传毒性相对强度,初步考察了宿主中介试验方法的可行性. 以2-乙酰基氨基芴等15种不同结构类型和作用机制的已知诱变剂进行方法学验证,并检测了环磷酰胺、丝裂霉素C等14种抗肿瘤药、黄酮类药物SIPI-549、SIPI-644和2种其它化合物的体内遗传毒性.结果显示HMA-DDRT与体外试验、以往文献报道的试验结果、AMES试验、微核试验、动物致癌性资料符合率分别为75.0％(24/32)、80.O％(8/L0)、71.8％(23/32)、81.O％(17/21)和77.3％(17/22).提示HMA-DDRT方法可用于筛检不同作用模式如经烷化、链断裂、交联等多种途径诱导DNA损伤的遗传毒物,由于采用了体内方法,可以参考受试物的吸收、分布、生物转化以及排泄等动力学参数,并可用同一检测系统对受试物进行体外和体内、动物各器官以及种系之间的遗传毒性比较,因而能定量预测受试物对人体遗传毒性的器官特异性,今后可能成为一组遗传毒性检测方法之一. 应用大肠杆菌UVRB/RECA差异性DNA修复体外试验方法(IN VITRO E.COLIDDRT),检测了11种放线菌发酵液对大肠杆菌的差异性致死效应.结果SIPI-95-919、SIPI-95-1060、SIPI-F5在加和不加外源性代谢活化系统的条件下均为阳性,而SIPI-95-983、SIPI-95-1073、SIPI-95-1098仅在加入外源性代谢活化系统的条件下为阳性,其余为阴性.实验结果与发酵液对体外培养细胞抗肿瘤活性较相符.因此可考虑将其开发成为微生物来源的抗肿瘤药的大规模筛选模型.
- 作者：
- 王吉成
- 学位授予单位：
- 上海医药工业研究院
- 专业名称：
- 微生物药学
- 授予学位：
- 博士
- 学位年度：
- 1998年
- 导师姓名：
- 许文思；钱蓓丽
- 关键词：
- 药物遗传毒性；DNA修复
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