缺氧后处理影响肺泡Ⅱ型上皮细胞线粒体途径凋亡机制的研究
目的:探讨缺氧后处理影响肺泡Ⅱ型上皮细胞线粒体途径凋亡的机制,为研究急性肺损伤保护措施提供新的实验依据。
方法:将传3代培养的人肺泡Ⅱ型上皮细胞系(A549细胞)随机分成3组,每组6个标本,分别为常氧(Normoxia)组、缺氧复氧(H/R)组和缺氧后处理(H-PostC)组。①Normoxia组(37℃,5％CO2,95％air)在培养箱中培养24h;②H/R组缺氧(37℃,5％CO2,95％N2)12h后再复氧(37℃,5％CO2,95％air)12h;③H-PostC组缺氧(37℃,5％CO2,95％N2)12h后给予重复三次的5min复氧/5min缺氧的后处理,继以恢复氧供(5％CO2,95％air)12h。实验前后在倒置相差显微镜下观察各组细胞形态学改变;利用流式细胞仪检测各组A549细胞的凋亡率;RT-PCR检测Bax、Bcl-2基因的表达量。
结果:①细胞形态学变化:Normoxia组:可见胞体呈梭形,细胞明亮,紧贴瓶底,无悬浮细胞:H/R组:胞体变圆,细胞间隙增宽,培养上清液中可见漂浮的细胞和细胞碎片;H-PostC:少部分细胞胞体变圆,细胞间隙稍增宽。②细胞凋亡率(％):三组间检测指标比较,差异均显著(P＜0.05)。与Normoxia组(0.3000±0.1276)比较,I/R组(7.2517±1.2648)明显升高(p＜0.05);而H-PostC组(4.1783±1.0364)则明显低于I/R组(p＜0.05)。③Bax基因的表达:三组间比较,差异均有显著性(P＜0.05);与Normoxia组(12.4733±1.0657)比较,H/R组(22.6800±0.3628)明显升高(p＜0.05);而H-PostC组(16.9583±0.6151)则明显低于H/R组(p＜0.05)。④Bcl-2基因的表达:三组间比较,差异均显著(P＜0.05)。与Normoxia组(27.4583±0.8504)比较,H/R组(17.9683±0.5299)明显降低(p＜0.05);而H-PostC组(23.1117±0.3676)则明显高于于H/R组(p＜0.05)。⑤Bax与Bcl-2基因表达的相关性分析:Bax与Bcl-2基因的表达成负相关(r=-0.765,p＜0.01).
结论:1.缺氧可致肺泡Ⅱ型上皮细胞通过线粒体途径凋亡;2.缺氧后处理能明显减少肺泡Ⅱ型上皮细胞的凋亡,线粒体途径参与其凋亡过程。
- 作者：
- 王理想
- 学位授予单位：
- 遵义医学院
- 专业名称：
- 外科学(心胸外科)
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2011年
- 导师姓名：
- 伍火志
- 中图分类号：
- R563.02
- 关键词：
- 肺泡Ⅱ型上皮细胞；缺氧后处理；线粒体途径；凋亡机制；急性肺损伤
- Alveolar epithelial typeⅡcell；Apoptosis；Mitochondria