23种红树植物根际土壤小双孢菌的选择性分离
Selective Isolation of Microbispora from Rhizhosphere Soil of 23 Different Mangrove Plants
小双孢菌属于链孢囊菌科.为研究红树林土壤中小双孢菌的资源的分布情况,从海南文昌头苑红树林保护区采集23种红树植物的根际土壤,进行小双孢菌的选择性分离.采用超声波处理30 min,120℃干热60 min或100℃干热60 min,1%氯胺-T处理30 min等预处理,平板稀释涂布法(10-1,10-2,10-3涂布于葡萄糖天门冬素培养基(GA)和腐殖酸(HV)两种选择性培养基,两种培养基中均添加复合维生素(0.5 mg/L)、放线菌酮(50 mg/L)、制霉菌素(50 mg/L)和重铬酸钾(50-100 mg/L).共分离得到199株放线菌,通过培养特征及显微形态观察,归类为链霉菌136株,非链霉菌63株.选择其中7株链霉菌和28株非链霉菌进行了16S rRNA基因序列分析,结果显示其中19株菌为小双孢菌属,7株为链霉菌属,4株为野野村菌属,2株为小单孢菌属,1株为链孢囊菌属,1株为阿萨诺氏菌属,1株为小单孢菌科未定属.其中菌株211020和212030很有可能为小双孢菌属中的新种,菌株210121可能是阿萨诺氏菌属的一个新种,菌株210417、菌株210432、菌株212202可能是野野村菌属的新种,菌株211018可能是小单孢菌科的一个新属.199株放线菌中有64株菌显示了生物活性,活性率为32.2%,其中有抗神经退行性疾病模型Caspase-3的1株,抗小鼠肉瘤细胞HCT-116的9株,抗糖尿病模型(proteintyrosine phosphatase 1B,PTP1B)的7株,抗耐药性金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcus aureus,MRSA)的9株,抗金黄色葡萄球菌ATCC 51650的15株,抗人肝癌细胞SMMC-7721的39株.而且10株菌具有两种生物活性,3株菌具有三种生物活性,其中,小双孢菌212030具有抗Caspase-3和抗金黄色葡萄球菌ATCC 51650两种活性.实验结果表明,对土样采用120℃干热处理60 min和1%氯胺-T处理30 min,结合GA和HV两种培养基分离,均能有效地从红树林根际土壤中选择性分离到小双孢菌,其中GA培养基的分离效果更加好.红树林根际土壤中蕴含着丰富的有生物活性的小双孢菌资源,并存在新种.
- 作者：
- 徐小雄
- 学位授予单位：
- 海南大学
- 专业名称：
- 微生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2009年
- 导师姓名：
- 洪葵
- 中图分类号：
- S714
- 关键词：
- 红树植物；根际土壤；选择分离；小双孢菌；多相分类
- Mangrove plant；Rhizosphere soil；Selective isolation；Microbispora