云南省曼谷并殖吸虫的形态及分子遗传学研究
The Morphology and Molecular Genetics Study of Paragonimus Bangkokensis in Yunnan Province
[目的]应用形态学分类及DNA序列分析相结合的方法鉴定采自云南省勐腊县的并殖吸虫标本,以确定其分类地位;将所测得的ITS2和CO I基因序列输入NCBI进行Blast同源性比较,确定其与已报道的并殖吸虫虫种的同源性和亲缘关系.[方法]从云南省勐腊县采集第二中间宿主溪蟹,分离囊蚴,将部分囊蚴感染实验动物获得成虫和虫卵,对成虫、囊蚴、后尾蚴和虫卵标本进行详细的形态学观测和描述;部分标本作DNA序列分析, Blast软件同源性比较,及MEGA4.0软件构建基因进化树.[结果]取自猫肺内的活体成虫个体小,深肉红色,椭圆形,平均大小为7.00x3.25mm,宽长比为1:2.34,腹吸盘稍大于口吸盘,两吸盘横径之比为1:1.14.卵巢平均大小为928.57*757.14μm,分8~10个细支,睾丸有2~4个短棒状分支,左睾平均大小为871.43*628.57μm;右睾为892.86*592.86μm.子宫管细小,卵黄腺发达.取自大鼠胸腔内的成虫为椭圆形,前部宽,大小为6.00x2.90 mm,宽长比为1:2.07,口腹吸盘横径之比为1:1.22,卵巢大小为714.29x574.43μm,分支细,睾丸分支粗短,分3叶,左睾大小为600.00*342.86μm,右睾大小为500.00*228.57μm.子宫与卵巢并列,卵黄腺发达,排泄囊直达肠叉后.囊蚴类圆形,具二层囊壁,内外壁之间有很大空隙,连外壁的囊蚴平均大小为(529.20±62.08)μm*(494.15±43.50)μm,不连外壁的囊蚴大小为(430.82±31.40)μmx(414.99±±35.07)μm.后尾蚴在囊内蜷曲成"U"形.虫卵椭圆形,金黄色,绝大多数两侧不甚对称,卵壳厚薄不均匀,末端增厚明显;卵盖位于较宽一端稍倾斜,肩峰多明显.虫卵大小为(67.744±8.67)μmx(42.32±3.98)μm.采自云南省勐腊县的并殖吸虫标本的ITS2和COⅠ基因序列分析表明,本研究样本与越南的曼谷并殖吸虫同源性分别为100%和99%,与泰国的曼谷并殖吸虫同源性分别为100%和95%,与泰国的哈氏并殖吸虫同源性分别为99%和94%;ITS2基因进化树显示本研究样本与泰国的哈氏并殖吸虫聚类为一支;COⅠ基因进化树显示本研究样本与越南的曼谷并殖吸虫聚类为一支.[结论]采自云南省勐腊县的并殖吸虫各期形态特征均符合曼谷并殖吸虫的形态特征.DNA序列分析显示本研究样本与越南的曼谷并殖吸虫同源性最高,CO I基因进化树中亲缘关系最近,ITS2基因同源性序列比较结果显示本研究样本与越南、泰国的曼谷并殖吸虫的同源性为100%,本研究从宏观的形态学与微观的基因遗传学两个层面上证实采自云南省勐腊县的并殖吸虫与越南和泰国的曼谷并殖吸虫为同一虫种.曼谷并殖吸虫在云南省的存在尚属首次报道,本研究应为新纪录,填补了云南省的空白.
- 作者：
- 万雅芳
- 学位授予单位：
- 昆明医学院
- 专业名称：
- 病原生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2011年
- 导师姓名：
- 周本江；王文林；雷霖；向征
- 中图分类号：
- R532.22
- 关键词：
- 曼谷并殖吸虫；哈氏并殖吸虫；DNA序列分析；ITS2；COⅠ；云南省
- Paragonimus bangkokensis；Paragonimus harinasutai；DNA sequence analysis；ITS2；COⅠ；Yunnan Province
- 基金项目：
- 云南省自然科