筛查天然药物IHA-01敏感肿瘤细胞株及其诱导凋亡机制的初步研究
To Screen Out Sensitive Tumor Cells of Traditional Chinese Medicine IHA-01 and Study on Its Apoptosis Inducement
目的:癌症的发病率和死亡率近几年呈明显的上升趋势,每年全世界约有700万人死于癌症,严重危害着人类的健康和生命.目前,治疗肿瘤的方法很多,在肿瘤的综合治疗中,药物治疗仍占有重要地位,现在全身化疗不论是单药还是联合化疗,多采用传统的化疗药物,癌症对大多数常规化疗药物反应不佳,毒副作用较大,在杀伤肿瘤细胞的同时,正常细胞也受到很大损害,而且肿瘤细胞对化疗药物易产生耐药性,使其在临床上的应用受到很多限制.因此,针对肿瘤发生和发展的原因,寻找和开发高效低毒的新型抗癌药物成为目前医学领域研究的重点.天然药物IHA-01(保密代称)是我院从云南传统药用植物中提取、精制的抗肿瘤活性成份,主要为倍半萜类化合物,其植物始载于《滇南本草》,可用于治疗消化道肿瘤、肺癌、乳腺癌等.IHA-01在体外具有抗肿瘤活性,但其作用机制尚不明确.因此,本研究通过筛选出天然药物IHA-01敏感的肿瘤细胞株,并对其诱导肿瘤细胞凋亡,探讨其可能的作用机制,为IHA-01抗肿瘤作用的研究奠定一定的理论和实验依据.方法:体外培养12株人肿瘤细胞,经5个浓度(3.125、6.25、12.5、25和50μg/ml)的IHA-01作用48小时后,光镜下观察肿瘤细胞形态改变,采用CCK-8试剂检测细胞抑制率并计算IC50值(半数抑制浓度),确认敏感肿瘤细胞株:采用IHA-01对敏感肿瘤靶细胞的最佳作用浓度处理24h, Annexin V/7-AAD试剂标染细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡;TeloTAGGG Telomerase PCR ELISA PLUS试剂盒检测IHA-01(1.29、6.25、12.5、25和50μg/ml)5个浓度作用24h后敏感肿瘤靶细胞端粒酶活性.结果:5个浓度IHA-01均能抑制12株人癌细胞的增殖,光镜下观察细胞失去原有形态,间隙增大,胞体皱缩,贴壁能力降低,细胞质密度增加,细胞膜完整.CCK-8试剂检测结果显示人结肠癌细胞HCT-8相对于其他细胞株,在较低浓度时即可出现明显的抑制作用,抑制率较其他细胞系高(P<0.05),其IC50值1.29μg/ml确定为最佳作用浓度;流式细胞仪检测结果显示被Annexin V/7-AAD双标上的细胞群,细胞凋亡率为62.3%;端粒酶活性检测显示最佳药物浓度作用时,HCT-8端粒酶活性得到抑制,且随着药物浓度的增加吸光度值逐渐降低,端粒酶的活性与药物浓度呈正相关.结论:在IHA-01对体外培养的12株人肿瘤细胞作用中,均能抑制细胞生长,其中人结肠癌HCT-8确定为敏感靶细胞株,光镜下观察肿瘤细胞受到明显抑制,流式细胞仪检测证实IHA-01能诱导肿瘤细胞凋亡,且可能与抑制端粒酶活性有关.
- 作者：
- 李秋恬
- 学位授予单位：
- 昆明医学院
- 专业名称：
- 肿瘤学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2011年
- 导师姓名：
- 董坚；陈明清；洪敏；李文亮
- 中图分类号：
- R730.54
- 关键词：
- IHA-01；HCT-8；CCK-8；细胞凋亡；端粒酶活性
- IHA-01；HCT-8；CCK-8；Apoptosis；Telomerase activity