Pg、Pi、Aa和Fn对HGFs增殖及IL-1β、1L-6和MMP-2表达的影响
HGFs were Influenced and IL-1β、IL-6、MMP-2 Activated by the Supernatant of Pg、Pi、Aa and Fn
[目的]:本实验探讨不同浓度梯度的牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis, Pg)、中间普氏菌(Prevotella intermedia, Pi)、伴放线放线杆菌(A.Actinomycetemcomitans, Aa)和具核梭形杆菌(Fusobactgerium Nucleatum, Fn)等四种细菌上清液对体外培养的人牙龈成纤维细胞(Human Gingival Fibroblasts, HGFs)增殖的影响以及对IL-1β、IL-6及MMP-2表达的影响,为研究Pg、Pi、Aa和Fn对人牙龈成纤维细胞的致病机制提供实验室依据.[方法]:采用组织块培养法进行人牙龈成纤维细胞的原代培养,取第6代人牙龈成纤维细胞用于实验.分别加入7组不同浓度梯度的Pg、Pi、Aa和Fn上清液,浓度分别为1*108CFU/mL、1*107CFU/mL、1*106CFU/mL1*105CFU/mL、1*104CFU/mL、1*103CFU/mL和1*102CFU/mL,以含1%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的培养基为空白对照.通过MTT法检测7组不同浓度梯度的Pg、Pi、Aa和Fn上清液在24h和48h对人牙龈成纤维细胞增殖的影响.以1*106CFU/mL Pg、Pi、Aa和Fn上清液刺激人牙龈成纤维细胞48h,RT-PCR观察人牙龈成纤维细胞中是否有IL-1β、IL-6和MMP-2的表达,以及ELISA检测IL-1β和IL-6产生的量,并对实验数据进行统计学分析.[结果]:本实验中浓度分别为1*108CFU/mL、1*107CFU/mL、1*106CFU/mL1*105CFU/mL、1*104CFU/mL、1*103CFU/mL和1*102CFU/mL的Pg、Pi、Aa和Fn的上清液,培养人牙龈成纤维细胞24h,与空白对照组相比,对人牙龈成纤维细胞的增殖抑制作用有统计学差异(P<0.05).同时,Pg、Pi、Aa和Fn上清液培养人牙龈成纤维细胞48h,与空白对照组相比,每种细菌的各浓度组对人牙龈成纤维细胞的增殖抑制作用有统计学差异,且较24h抑制作用更为明显(P<0.05).RT-PCR检测到IL-6和MMP-2表达,但未检测到IL-1β的表达;ELISA检测IL-1β和IL-6显示:Pg、Pi、Aa和Fn上清液刺激人牙龈成纤维细胞48h,产生IL-6的量较IL-1β多,其中Pg刺激所产生的IL-6和IL-1β在四种细菌中最高.[结论]:1、Pg、Pi、Aa和Fn上清液在24h,1*108CFU/mL、1*107CFU/mL1*106CFU/mL、1*105CFU/mL、1*104CFU/mL、1*103CFU/mL矛口1*102CFU/mL各浓度对人牙龈成纤维细胞均有抑制作用;2、Pg、Pi、Aa和Fn上滞液在48h,1*108CFU/mL、1*107CFU/mL、1*106CFU/mL、1*105CFU/mL、1*104CFU/mL、1*103CFU/mL和1*102CFU/mL各浓度对人牙龈成纤维细胞均有抑制作用,且较24h抑制作用更为明显;3、Pg、Pi、Aa和Fn对人牙龈成纤维细胞的抑制作用呈时间和浓度依赖性;4、Pg、Pi、Aa和Fn对人牙龈成纤维细胞的抑制作用从强到弱依次为:Pg、Pi、Aa和Fn;5、48h时,以1*106CFU/mL的Pg、Pi、Aa和Fn上清液刺激人牙龈成纤维细胞,RT-PCR检测到IL-6和MMP-2的表达,ELISA检测显示IL-6产生的量较IL-1β多.
- 作者：
- 黄迪
- 学位授予单位：
- 昆明医学院
- 专业名称：
- 口腔临床医学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2011年
- 导师姓名：
- 税艳青；张明珠；朱红；张婉丽
- 中图分类号：
- R781.4
- 关键词：
- 牙龈卟啉单胞菌；中间普氏菌；伴放线放线杆菌；具核梭形杆菌；人牙龈成纤维细胞
- Porphyromonas gingivalis；Prevotella intermedia；A. actinomycetemcomitans；Fusobactgerium nucleatum；Human Gingival Fibroblasts