雷帕霉素与顺铂联合应用对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响
Impact of Rapamycin Combined Cisplatin on the Tumor Growth of Human Cervical Carcinoma Subcutaneous Xenograft in Nude Mice
背景:近年来,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)因处于生长调节的中心环节而广泛应用于肿瘤治疗的研究中,其特异性抑制剂雷帕霉素更是研究的热点.有学者发现,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是介导肿瘤细胞缺氧适应的关键性转录调控因子,在多种恶性实体瘤中高表达.HIF-1α能激活多种缺氧适应性基因如血管内皮生长因子(VEGF)、EPO等的表达,可维持肿瘤细胞的能量代谢,刺激新血管的生成以及促进肿瘤的增殖和转移,其中VEGF是最关键的血管生成促进因子.众所周知肿瘤的生长和扩散转移与血管生成密切相关.因此,拮抗HIF-1α的活性可能是肿瘤治疗中一个极具潜力的靶点.近年研究表明雷帕霉素能在转录和翻译水平阻断HIF-1α表达,进而起到抗肿瘤的作用,从而为雷帕霉素与经典化疗药物联合应用于肿瘤治疗提供了新思路.目的:探讨雷帕霉素(RPM)与顺铂(DDP)联合应用对人宫颈癌皮下裸鼠移植瘤生长的抑制作用及对HIF-1α及VEGF表达的影响,以期寻求更有效的宫颈癌的药物治疗方法.方法:1建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型.实验分为四组:对照组、RPM组、DDP组及联合组.药物干预2周后处死裸鼠,观察瘤重和体积并计算肿瘤抑制率.保存瘤组织用于后续实验.2、免疫组化技术检测对照组、RPM组、DDP组及联合组肿瘤组织中HIF-1α和VEGF的定位表达.3、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞HIF-1α和VEGF mRNA的表达.4、蛋白印迹免疫(Western blot)技术检测各组细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达.5、所得数据应用SPSS16.0统计分析软件进行分析.结果:1 PRM组、DDP组及联合组肿瘤体积依次为797.81±111.98 mm3、3766.155±132.274 mm3、568.701±36.115 mm3,与对照1227.46±56.654mm3比较,抑瘤率分别为35.0%、37.6%、53.7%,其差异有统计学意义(P<0.05).其中PRM组与联合组、DDP组与联合组之间两两比较差异有统计学意义(P<0.05),而PRM组与DDP组之间两两比较差异无统计学意义(P=0.688).2免疫组化染色检测HIF-1α在胞浆及胞核中均着色,而VEGF着色主要分布在胞浆,各实验组尤其联合组HIF-1α及VEGF的阳性细胞数明显弱于对照组.3 RT-PCR及Western blot结果显示,PRM组、DDP组及联合组HIF-1α和VEGF的表达较对照组明显降低,其差异有统计意义(P<0.05).其中PRM组与联合组、DDP组与联合组两两比较差异有统计学意义(P<0.05),而PRM组与DDP组比较差异无统计学意义(P=0.068).说明各实验组在转录及翻译水平对HIF-1α及VEGF的表达均有明显的抑制作用.结论1、雷帕霉素明显抑制宫颈癌Hela细胞的增殖活性及下调HIF-1α、VEGF表达.2、雷帕霉素与顺铂联合运用不仅可显著抑制宫颈癌Hela细胞的增殖活性及下调HIF-1α、VEGF的表达,而且能够减轻传统化疗药物的副作用,其疗效显著优于单独用药.因此两者联合用药有望成为宫颈癌治疗的一种新思路.
- 作者：
- 杨丽肖
- 学位授予单位：
- 大连医科大学
- 专业名称：
- 妇产科学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2010年
- 导师姓名：
- 韩璐
- 中图分类号：
- R737.33
- 关键词：
- 宫颈癌；裸鼠；雷帕霉素；低氧诱导因子-1α；血管内皮生长因子
- cervical cancer；nude mice；rapamycin；hypoxia inducible factor-1α；vascular endothelial growth factor