脂质体介导CK13基因对鼻咽癌HNE1细胞株放疗敏感性的影响
Radio-sensitivity Effect of CK13 Gene Mediated by Lipofectin on Nasopharyngeal Carcinoma Cell Strain HNE1
[研究目的]本文探讨CK13基因对鼻咽癌HNE1细胞株放射敏感性的影响.我们采用脂质体介导转染方法将携带CK13基因的真核表达质粒CK13-A和CK13-B,空载体质粒pEGFP-N1分别转染到鼻咽癌细胞株HNE1中.克隆形成实验测定细胞存活分数.采用单击多靶模型和线性二次函数模型拟合细胞存活曲线,求出放射生物学参数D0、Dq、N和α、β、α/β、SF2值,探讨CK13基因与鼻咽癌HNE1细胞株放射敏感性的关系,以CK13基因为靶点进行相关研究,可为临床提高鼻咽癌放疗敏感性提供新的思路.[研究方法]1.目的基因的制备;重组DNA;转染;筛选.2.携带CK13基因的质粒CK13-A、CK13-B和空载体质粒(pEGFE-N1)的转化、扩增、酶切与测序鉴定分析.3.阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导,将CK13-A;CK13-B质粒和空载体质粒pEGFP-N1转染至HNE1细胞中.分别命名为A组、B组、O组和H组.4.克隆形成实验测定细胞剂量存活分数,采用线性二次函数模型(L-Q模型)和单击多靶模型拟合细胞辐射剂量存活曲线,分别求出A组、B组、O组、H组的放射生物学参数.[研究结果]1.携带CK13基因的CK13-A、CK13-B质粒和空载体质粒pEGFP-N1满足实验要求.2.以LipofectamineTM2000介导,CK13-A、CK13-B质粒和空载体质粒(pEGFP-N1)成功地转染到HNE1中,转染细胞组分别命名为A组、B组、O组和未转染的HNE1细胞H组.3.克隆形成实验测定细胞剂量存活分数,采用线性二次函数模型(LQ模型)和单击多靶模型拟合细胞辐射剂量存活曲线.A组、B组、O组、H组在单击多靶模型中D0值分别是2.384、2.818、3.259、3.546;Dq值0.878、1.135、1.399、1.581;SF2值0.627、0.637、0.640、0.725.A组、B组、O组、H组在线性二次函数中α值分别是0.248、0.261、0.171、0.160;β值0.034、0.025、0.030、0.043;SF2值0.648、0.657、0.769、0.710;α/β值7.29、10.44、5.70、3.72.与HNE1细胞、转染空载体质粒O组的细胞比较,转染CK13基因后,A组和B组的D0、Dq、SF2均减小,α值、α/β值增大,证明CK13基因对鼻咽癌HNE1细胞株有放射增敏性.[结论]CK13基因能明显提高鼻咽癌HNE1细胞株的放射敏感性.
- 作者：
- 张昌明
- 学位授予单位：
- 昆明医学院
- 专业名称：
- 耳鼻咽喉科学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2010年
- 导师姓名：
- 余宏；徐青；高雪
- 中图分类号：
- R739.63
- 关键词：
- 鼻咽癌HNE1细胞株；CK13基因；放射敏感性；Lipofectamine~(TM)2000
- Nasopharyngeal carcinoma cell strain HNE1；CK13Gene；radio-sensitivity；Lipofectamme~(TM)2000