骨髓间充质干细胞治疗兔多器官功能不全综合征细胞凋亡的影响
Mesnchymal Stem Cells for Treatment of Multiple Organ Dysfunction Syndrome in Rabbits and Apoptosis Inhibitory Research
[目的]:将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的兔骨髓间充质干细胞(rabbit mesenchymal stem cells,MSC),经股动脉插管移植至多器官功能不全综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)模型兔,检测移植对MODS兔受累器官组织恢复状况及细胞凋亡蛋白酶活化因子-1 mRNA(Apaf-1 mRNA)表达及影响,探讨MSC应用于MODS治疗的可能性和应用前景.[方法]:体外获得GFP-MSC.将实验兔随机分为3组:正常组5只;模型组15只;移植组15只,建立两次打击MODS动物模型.造模成功24h后,将GFP-MSC按照3*106cells/kg经股动脉插管至左心室进行回输,分别于第1、7、14、21和28天抽血检测三组动物的动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cre)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)的变化;第28天全部处死后,取兔心、肝、脾、肺、肾组织制作切片,观察MSC移植后在MODS动物模型宿主内的存活情况及MSC移植对受损器官抗凋亡的效果;并通过RT-PCR技术检测MSC移植前后凋亡因子Apaf-1 mRNA在心、肝、脾、肺、肾组织中的表达变化.[结果]:MSC能够正常贴壁成长并具有相应的分化能力,通过慢病毒转染GFP基因后不影响其正常生长及分化能力,抗原表达为CD34-/CD45-/CD73+/CD105+.模型组动物的PaO2、PaCO2、ALT、AST、BUN、Cre、CK-MB与正常组比较有显著差异,与临床病症类似.MSC移植后相关功能指标有所改善,具有抗凋亡和促进受损器官恢复的作用;移植后第28天在动物的组织切片中发现心、肝、脾、肺、肾器官组织中有绿色荧光存在,说明MSC已经发生归巢,并参与了机体重建;RT-PCR检测结果显示正常心、肝、脾、肺、肾组织中均有Apaf-1 mRNA的表达;模型组心、脾、肾Apaf-1 mRNA的表达量较正常组明显增加(P<0.01),而移植组Apaf-1 mRNA的表达量低于模型组,接近正常组水平(P<0.01).[结论]:①建立了GFP标记的RMSC的体外分离、培养及鉴定的技术平台.②成功建立了兔MODS模型,并且移植组的各项功能指标PaO2、PaCO2、ALT、AST、BUN、Cre、CK-MB有所改善;MSC能够参与MODS兔的受损脏器的恢复并抑制受损器官的凋亡过程.③RT-PCR结果显示正常组织心、肝、脾、肺、肾脏器中均有Apaf-1的表达,而MSC能够下调Apaf-1 mRNA在MODS模型动物的心、肝、脾、肺、肾组织中的表达,提示MSC移植有望为MODS提供新的治疗方法.
- 作者：
- 陈静
- 学位授予单位：
- 昆明医学院
- 专业名称：
- 麻醉学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2010年
- 导师姓名：
- 凌斌；孙洁；潘兴华；刘萍
- 中图分类号：
- R459.7
- 关键词：
- 兔；多器官功能不全综合征；骨髓间充质干细胞；移植；细胞凋亡
- Rabbit；MODS；MSC；transplantation；apoptosis