铜绿假单胞菌制剂对大鼠C6胶质瘤治疗作用的实验研究
The Mechanism Study of the Effect of Pseudomonas Aeruginosa Injectionon Rat C6 Glioma
目的:采用重建基底膜细胞侵袭实验,研究铜绿假单胞菌(PA-MSHA)制剂对大鼠C6胶质瘤细胞侵袭特性的影响;建立SD大鼠C6胶质瘤同种移植动物模型,观察PA-MSHA制剂对其成瘤性的作用,探讨PA-MSHA在体内引起肿瘤生长抑制的作用机制,为胶质瘤术后辅助治疗探索切实有效的新方法.方法:以Matrigel胶模拟重建基底膜,采用Transwell小室建立细胞侵袭模型,观察不同浓度的PA-MSHA制剂对体外培养的C6神经胶质瘤细胞侵袭能力的影响;选用雄性健康SD大鼠40只,体重在180-200g之间,随机分为两组,每组20只,I.瘤实质生理盐水对照组;Ⅱ.瘤实质PA-MSHA治疗组.通过体外培养大鼠C6胶质瘤细胞,测定细胞活力,收集对数生长期生长状态良好的C6胶质瘤细胞,调整细胞浓度为1.0*107/ml,按1.0*107个细胞/只鼠的细胞数接种,每只鼠注1.0ml于左后肢皮下.皮下接种C6胶质瘤细胞第10天,原接种部位瘤实质分别注射0.25ml PA-MSHA和等体积的生理盐水,连续一周;观察荷瘤鼠给药前后的一般精神状态、饮食、体重、肢体偏瘫及肿瘤生长情况,测定肿瘤增殖率;HE染色和透射电镜形态学观察C6胶质瘤组织;分别于第8天和20天采集大鼠外周静脉血,流式细胞仪检测两组SD大鼠给药前后的免疫功能.结果:1.侵袭实验表明空白组中C6胶质瘤细胞侵袭能力强,有大量细胞穿透Matrigel胶,到达滤膜下方的细胞数为(79.85±2.13)个,PA-MSHA制剂(1.0*109cfu/ml)组作用下的C6胶质瘤细胞侵袭能力有所下降,到达滤膜下方的细胞数为(21.90±1.55)个,2.0*109cfu/ml作用下C6胶质瘤细胞侵袭能力明显降低,少量细胞穿透Matrigel胶,到达滤膜下方的细胞数为(16.10±1.48)个.PA-MSHA制剂作用下的C6细胞侵袭能力与空白组相比,差别均有统计学意义(p<0.001).2.成功建立SD大鼠C6胶质瘤同种移植动物模型本实验所用C6胶质瘤细胞,在常规培养条件下贴壁生长,每次接种前收集对数生长期生长状态良好的C6胶质瘤细胞,进行活力测定,存活率>95%.接种后8天可触及大鼠皮下米粒样大小肿块,接种后10天所有大鼠都可触及肿物.3.荷瘤鼠给药后的一般情况及肿瘤增殖率测定40只SD大鼠接种C6胶质瘤细胞8天,表现为活动能力减弱,肢体肌力减退,自身旋转、蹒跚步态,随时间增加出现肢体偏瘫等症状.PA-MSHA治疗组肿瘤增殖率为26.4%.4.HE染色形态学和透射电镜观察C6胶质瘤组织大鼠分别于接种后22天,麻醉下切除瘤体.HE染色可见PA-MSHA治疗组C6胶质瘤细胞数目较对照组减少,并可见到胶质瘤细胞核分裂像减少、部分区域出现变性坏死,并可见明显的炎症反应.电镜结果可见对照组C6胶质瘤细胞核呈不规则形状,可见核切迹,细胞核大,核形不规则,染色质分布均匀;PA-MSHA治疗组C6胶质瘤细胞核固缩,染色质趋边聚集,排列于核膜内侧,呈早期凋亡改变.5.流式细胞仪检测铜绿假单胞菌制剂对细胞因子的影响流式细胞仪检测第8天和20天采集的血清,结果显示肿瘤治疗前、生理盐水对照组、PA-MSHA治疗组血清中细胞因子水平有明显差异(P<0.05).结论:铜绿假单胞菌(PA-MSHA)制剂对C6胶质瘤增殖和侵袭性生长具有抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡,提升机体免疫监视功能有关,并可以调节其它细胞因子的表达.
- 作者：
- 尹航
- 学位授予单位：
- 昆明医学院
- 专业名称：
- 外科学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2010年
- 导师姓名：
- 宋晓斌；沈志强；陈鹏；杨智勇；王进昆；丁鹏
- 中图分类号：
- R739.4
- 关键词：
- 胶质瘤；铜绿假单胞菌制剂；侵袭；免疫
- C6 glioma；PA-MSHA；Invasion；Immunity