大麦醇溶蛋白RNAi植物表达载体的构建及幼胚高效再生体系的建立
Construction of RNAi Plant Expression Vector in Barley and Establishing the Efficient Regeneration System for Barly Immature Embryo
大麦作为啤酒生产的主要原料和一种优良的饲料作物,在我国具有很大发展潜力.大麦的品种改良现多集中于啤用大麦与饲用大麦的品质改良及各种抗性的研究,在啤酒大麦方面,大麦籽粒蛋白质含量的高低是决定本身用途及作为主要品质评价指标之一.为了降低啤酒大麦蛋白的含量,以提高啤酒大麦品质,本研究利用甘肃推广面积最大的品种甘啤4号为材料,克隆大麦醇溶蛋白基因保守区序列,构建RNAi表达载体,为进一步通过RNAi技术改良大麦品质奠定理论基础.根据已知大麦醇溶蛋白基因保守序列设计一对特异性引物B2PF5'-CAACCATTTCCACAG-CAACCACCAT-3', B2PR5'-GAAAGATAGAGTAGACGATTGCACG-3',采用PCR技术从甘啤4号大麦基因组中获得了1个349bp片段(GP4).依据载体pHANNIBAL和pART27的结构,分别将GP4按所对应酶切位点正反向插入,利用热激法转化.结果分析显示,克隆出的片段与GenBank (NCBI)中醇溶蛋白基因核苷酸序列同源性高达92%,所构建成的RNAi表达载体pART27-pHAN-GP4中含目的片段.幼胚具有较快的生长速度和较佳的生理状态,因此以幼胚为外植体建立高效的再生体系有重要的意义.本实验以甘啤4号的幼胚为外植体,研究了不同培养基和激素配比对甘啤4号幼胚愈伤组织的诱导及植株再生的影响结果表明,不同的培养基和不同激素配比对幼胚愈伤组织的诱导率及分化率不同;甘啤4号在愈伤诱导过程中,IM2上出愈率较高,达71%;IM1与IM2上形成的愈伤质量较IM3好;相同的培养基中,dicamba能显著提高甘啤4号出愈率;不同分化培养基的分化效率不同,在DMl上的分化率高于在DM2的分化率;研究证明甘啤4号愈伤组织诱导频率及绿苗分化率均较高,适合于遗传转化的受体材料.为进一步遗传转化奠定了基础.
- 作者：
- 闰永荣
- 学位授予单位：
- 甘肃农业大学
- 专业名称：
- 作物遗传育种
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2010年
- 导师姓名：
- 张正英
- 中图分类号：
- S512.3
- 关键词：
- 甘啤4号大麦；幼胚；醇溶蛋白；RNAi表达载体
- Gansu Beer Barley No.4；immature embryo；Hordein；RNAi expression vector