CXCR4的表达及阻断对膀胱癌细胞侵袭力影响的实验研究
Preliminary Study on Influence of Expression and Blocking of CXCR4 on Invasiveness of Bladder Carcinoma Cells
目的:观察CXCR4在膀胱癌细胞株EJ及其高侵袭力亚系EJ-M3细胞中的表达情况并分析CXCR4的表达对细胞侵袭力的影响;构建靶向CXCR4的特异性siRNA真核表达载体,转染EJ-M3细胞后观察CXCR4基因的表达情况并观察特异性siRNA对EJ-M3细胞侵袭力的影响.方法:分别用细胞免疫荧光法和流式细胞术检测CXCR4蛋白在膀胱癌细胞株EJ及其高侵袭力亚系EJ-M3细胞中的表达;构建和转染重组质粒pshRNA-CXCR4-1和pshRNA-CXCR4-2至EJ-M3细胞株,通过细胞免疫荧光和半定量RT-PCR检测EJ-M3中CXCR4蛋白的表达及其mRNA转录水平的变化;利用体外侵袭试验模型观察siRNA-CXCR4-1作用于CXCR4基因后EJ-M3细胞侵袭力的变化,并且将RNA干扰试验中的细胞免疫荧光、RT-PCR的结果和侵袭试验的结果进行相关分析.结果:CXCR4在两株细胞中均有表达并且主要表达在细胞膜和细胞质中,EJ-M3细胞阳性表达率(65.7%±10.35%)明显高于EJ细胞(25.4%±4.69%),有显著性差异(P<0.05);成功的设计和构建重组质粒pshRNA-CXCR4-1和重组质粒pshRNA-CXCR4-2,转染EJ-M3细胞后细胞免疫荧光检测到转染重组质粒pshRNA-CXCR4-1的实验组CXCR4荧光强度明显低于重组质粒pshRNA-CXCR4-2实验组以及空白对照组和阴性对照组,另外RT-PCR结果显示重组质粒pshRNA-CXCR4-1实验组CXCR4 mRNA的表达水平(0.153±0.02)明显低于重组质粒pshRNA-CXCR4-2实验组(0.46±0.03),空白对照组(0.43±0.07)和阴性对照组(0.41±0.05),有显著性差异,(P<0.05);体外侵袭实验中pshRNA-CXCR4-1实验组穿膜细胞数(39..67±8.45)明显少于空白对照组穿膜细胞数(135.33±9.28)及阴性对照组穿膜细胞数(123.63±6.36),有显著性差异,(P<0.05);另外,EJ-M3细胞株的体外侵袭能力与其CXCR4蛋白和CXCR4mRNA的表达水平呈正相关,(pCXCR4蛋白<0.05,pmRNA<0.05),有显著性差异.结论:成功设计和构建的重组质粒pshRNA-CXCR4-1,将其转入膀胱癌细胞株EJ-M3中可以明显的抑制细胞内CXCR4蛋白的表达及CXCR4 mRNA的转录,并能在体外侵袭试验中抑制EJ-M3细胞的体外侵袭力;得出CXCR4是影响膀胱肿瘤细胞株体外侵袭力的重要因素,在介导膀胱肿瘤细胞的体外侵袭过程中起到重要的作用,为膀胱癌腔内种植转移机理的研究提供了新的理论依据,也为小RNA干扰技术防治膀胱肿瘤的种植转移奠定了试验基础.
- 作者：
- 王凯
- 学位授予单位：
- 昆明医学院
- 专业名称：
- 泌尿外科学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2010年
- 导师姓名：
- 杨德林；徐鸿毅；王剑松；石永福
- 中图分类号：
- R737.14
- 关键词：
- CXCR4；小干扰RNA；膀胱癌；侵袭力
- CXCR4；small interference RNA；bladder carcinoma；invasiveness