甘农2号和甘农3号苜蓿再生体系的建立及抗旱耐盐基因转化的研究
The Establishment of Regeneration Systems and Anti-drought Gene Transformation of Alfalfa
土壤盐渍化是影响植物生长和产量的环境因子.紫花苜蓿为生长面积最大,利用价值最高的优质牧草.利用转基因技术培养苜蓿抗旱耐盐新品种是目前牧草育种中最有效的手段.本研究拟利用农杆菌介导法,将抗旱基因转入苜蓿中,以提高其抗旱耐盐性.本文通过对2个苜蓿育成品种(甘农2号、甘农3号)再生能力的比较,筛选出较为高效的再生体系品种.利用根癌农杆菌介导法对其进行了抗旱基因的遗传转化的研究,得到了Kan抗性植株.主要研究内容:1.再生体系的建立.本实验中,甘农2号和3号最佳外植体是下胚轴.对于甘农2号,3 mg/L 2,4-D +1.5mg/L NAA为其愈伤组织诱导阶段最佳激素组合,2,4-D作用时间15天为宜;最佳的芽分化培养基为MS+0.5 mg/L KT+0.1mg/L NAA+7g/L琼脂+20g/L蔗糖.甘农3号愈伤组织诱导阶段最佳培养基为MS+ 2,4-D(2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)+蔗糖30g/L+琼脂7g/L;最佳的芽分化培养基为MS+NAA(0.3 mg/L)+KT(0.5mg/L)+蔗糖20g/L+琼脂7g/L.经比较甘农3号的再生能力优于甘农2号.2.遗传转化体系的建立.以培养7天的甘农3号紫花苜蓿的无菌苗下胚轴为外植体,以农杆菌菌株为介体,优化的基因转化体系如下:Kan筛选浓度定为20mg/L,选择方法为后期选择;抑菌剂选取羧苄青霉素为宜,愈伤诱导阶段浓度为300mg/L,体胚形成及芽诱导分化阶段浓度为200mg/L;用于转化的侵染时间为10 min,菌液浓度OD600=0.3~0.5,外植体预培养时间为3d,与农杆菌共培养3d,乙酰丁香酮浓度为20 mg/L有利于转化.经筛选,得到23株抗Kan的甘农3号转化植株.其中4株经PCR检测,均表现为假阳性.
- 作者：
- 胡静
- 学位授予单位：
- 甘肃农业大学
- 专业名称：
- 草业科学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2007年
- 导师姓名：
- 马晖玲
- 中图分类号：
- S541.9
- 关键词：
- 苜蓿；再生体系；根癌农杆菌；转化
- Medicago sativ L.；Regeneration tissue culture system；Agrobacterium-mediated transformation