蓝耳病病毒三种不同检测方法的建立
Establishment of Three Different Methods for Detecting PRRSV
蓝耳病病毒可以引起母猪流产、早产、死胎、木乃伊胎及仔猪体质弱等病征,造成重大的经济损失.近年来在我国出现了一种新的高致病性病毒,为了检测这种新病毒需要建立一系列可以满足不同试验条件的检测方法.为此我们建立了RT-PCR、RT-LAMP和Real-Time荧光PCR这三种常规的检测方法.本研究选择高致病性蓝耳病病毒为研究对象,从NCBI上查阅多对高致病性蓝耳病病毒和正常病性蓝耳病病毒序列,分析高致病性蓝耳病和正常的蓝耳病病毒基因的结构特点,选择Nsp2基因和ORF7基因作为主要的研究对象,设计出多对引物及探针,用于RT-PCR、RT-LAMP和Real-Time荧光RT-PCR的方法进行检测分析.将蓝耳病病毒接种于Marc-145细胞进行培养,观测细胞病变征状.将病变细胞反复冻融3次后进行病毒传代培养.然后取传代多次后的病毒培养液分别进行RT-PCR、RT-LAMP和Real-Time荧光PCR试验.经过试验发现高致病性蓝耳病与传统蓝耳病病毒相比在Nsp2有连续87bp的缺少,而ORF7则较为保守,建立了3种可满足不同检测条件的方法,方便了蓝耳病的检测.
- 作者：
- 顾海洋
- 学位授予单位：
- 塔里木大学
- 专业名称：
- 生物化学与分子生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2011年
- 导师姓名：
- 李莲瑞；杨素
- 中图分类号：
- S858.28
- 关键词：
- 蓝耳病病毒；Nsp2基因；ORF7基因；检测
- PRRSV；Nsp2 gene；ORF7 gene；Detection