多杀菌素的提取纯化工艺研究
Research on Extraction and Purification of Spinosad
本论文首先建立了多杀菌素的高效液相色谱检测方法,该法能准确地测定多杀菌素的浓度.通过对发酵液中多杀菌素的理化性质进行探索,结果表明,多杀菌素在中性、偏碱性条件下比较稳定,强酸性条件下稳定性差;在2070℃温度范围内,具有较高的热稳定性.发酵液pH为10时,多杀菌素提取效果较好.有机溶剂萃取试验中,选择乙酸乙酯为适宜萃取剂,萃取体积约为等体积的提取液体积,以萃取3次最佳.本论文研究了多杀菌素的超声波提取工艺,并依据中心复合旋转设计原理,在单因素试验的基础上,采用三因素五水平的响应曲面分析法,考察了提取时间、料液比和提取频率对多杀菌素浓度的影响.结果表明:优化后的提取条件为:提取频率75kHZ,提取时间74min,料液比1:1.5.在此提取条件下,多杀菌素的浓度相对较高,可达到100.75μg/mL.多杀菌素提取液经大孔吸附树脂吸附后,选用丙酮/水洗脱,结果表明,在70%95%丙酮/水洗脱范围内,多杀菌素被大量地洗脱,回收率可达80.72%.以硅胶薄层色谱初步筛选硅胶柱层析分离条件,在此基础上,采用石油醚/乙酸乙酯/甲醇洗脱,以TLC跟踪检测多杀菌素,结果取得了较好的分离效果,多杀菌素纯度达到90%95%.考察了阴离子交换树脂对多杀菌素提取液的脱色效果,实验结果表明,优化后的脱色工艺条件为:脱色时间3h,树脂添加量为4%(g/V),摇床转速150r/min,脱色pH10,在以上操作条件下,201*7型树脂对多杀菌素提取液的脱色率可达到80%以上,而多杀菌素损失率仅为2%左右.脱色后的产品在色泽上有明显改观,基本能达到生产要求.
- 作者：
- 秦为辉
- 学位授予单位：
- 武汉工业学院
- 专业名称：
- 微生物与生化药学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2010年
- 导师姓名：
- 陈新；张晓琳
- 中图分类号：
- S482.3
- 关键词：
- 刺糖多孢菌；多杀菌素；提取；纯化；脱色；响应曲面法
- Saccharopolyspora spinosa；spinosad；extraction；purification；decolorization；response surface methodology