阿维拉霉素高产菌的选育与发酵工艺研究
Study on Breeding of Avilamycin Producing Strains and Conditions of Fermentation
阿维拉霉素又称卑霉素,是寡糖霉素族类抗生素,作为饲料添加剂应用于畜牧业上可防治禽畜腹泻,提高存活率,并可提高饲料转化率,具有明显的育肥和促生长作用.本文从其理化性质,菌种诱变筛选方法,培养基及发酵条件等方面做了研究.本实验以产绿链霉菌Tü57( Streptomyces viridochromogenes Tü57)为出发菌株,以阿维拉霉素A的含量为指标成分进行正向突变体的筛选.我们首先通过紫外线诱变和化学诱变技术诱变原始出发菌株并筛选到了符合要求的正向突变菌株,阿维拉霉素A的产量由8.62mg/L提高到15.26mg/L.然后在此基础上,通过原生质体多轮递推融合技术,将通过不同途径筛选获得的突变体进行了融合重组,获得了产量进一步提高的突变体,产量由15.26mg/L提高到52.62mg/L.在筛选突变子的过程中,本文尝试用薄层-紫外分光光度法检测阿维拉霉素的含量,进行初筛.该法以二氯甲烷-甲醇( 9: 1)做为展开剂,在HF254硅胶板上点样展层后,刮取有效斑点,以甲醇溶出,置紫外212.0 nm处测定吸光度,与标准曲线对照,求出其含量,工作曲线在10~60μg/ml范围内线性关系良好, R2=0.9988,平均回收率在100.5%.该方法操作较简便,快速,准确,尤其适合应用于目前阿维拉霉素高产菌大规模筛选时发酵液含量的测定.对初筛得到的高产菌株,以高效液相色谱法完成菌株的复筛.根据阿维拉霉素为细胞内产物的原理,通过向培养基中添加大孔树脂X-5和表面活性剂吐温-80,尝试通过大孔树脂吸附发酵液中的阿维拉霉素,利用表面活性剂改变细胞膜的通透性,降低阿维拉霉素代谢合成的负反馈抑制作用,改善发酵时气液表面的状态以及发酵液流动性的功能,以提高抗生素发酵产量.结果表明,培养基中添加6%的大孔树脂X-5和0.3%的吐温-80时可显著提高抗生素的发酵产量.该菌株的发酵产量进一步由52.62mg/L提高了至87.14mg/L.
- 作者：
- 李政
- 学位授予单位：
- 武汉工业学院
- 专业名称：
- 微生物与生化药学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2010年
- 导师姓名：
- 陶兴无
- 中图分类号：
- TQ465
- 关键词：
- 阿维拉霉素；发酵；表面活性剂；原生质体融合；菌种选育；产绿链霉素Tü57
- avilamycin；fermentation；surfactant；Genome shuffling；breeding；Streptomyces viridochromogenes Tü57