蜂胶黄酮的提取及其抗氧化活性的研究
本文以蜂胶为原料，采用乙醇超声波提取和超临界二氧化碳萃取两种方法提取蜂胶中的黄酮类化合物，并确定其最佳提取工艺和参数。采用气质、液相色谱、紫外分光光度计测定其黄酮成分及含量。采用二苯代苦味肼基(DPPH·)自由基分析法、油脂抗氧化法等五种方法测定蜂胶黄酮提取物的抗氧化性能。
主要实验结果如下：
1、以芦丁为标准品、采用AlCl3法测定总黄酮结果稳定。在芦丁0-0.2mg/mL浓度范围内线性较好，标准曲线方程为Y=0.2936X+0.0025，其R2值为0.9997。五次重复测定的RSD值仅为1.222％;在五次加样回收率试验中，其平均加样回收率达到103.33％,RSD值为1.8％。表明此法精密度高、重现性好且回收率较高。
2、采用甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷七种不同极性溶剂，提取蜂胶中黄酮类化合物的能力顺序为：丙酮＞甲醇＞乙醇＞乙醚＞正丁醇＞乙酸乙酯＞三氯甲烷。其中乙醇的提取能力稍低于丙酮和甲醇，综合考虑成本与溶剂毒性，实验选择乙醇为提取溶剂。
3、通过正交实验表明乙醇超声波提取蜂胶的最佳工艺条件为：采用15倍量的无水乙醇浸提蜂胶12hr，超声提取3次，每次15min。
4、通过对萃取压力、温度、时间、固液比、乙醇浓度的单因素实验可知：超临界CO2萃取的优化工艺参数为：萃取压力为25MPa，萃取温度50℃，萃取时间3.5小时，固液比6:1，乙醇浓度100％。
5、采用分光光度计法测得最佳工艺条件下乙醇超声波提取蜂胶总黄酮含量（以芦丁计）为29.00％，超临界CO2萃取蜂胶总黄酮含量（以芦丁计）为15.21％。
6、采用GC-MS顶空分析法对两种方法得到的蜂胶提取物挥发组分进行化学成分及含量的分析，结果表明：两种方法得到的蜂胶提取物在化学成分上存在差异。乙醇超声波提取蜂胶中只含有黄酮类化合物柏木烯，含量为1.37％。蜂胶超临界萃取物中含有1,8-桉叶油素、苏合香烯、3-甲基2-丁烯酸乙酯、三甲基枯烯、柏木烯、芳樟醇、柏木脑、乙位桉叶烯等黄酮化合物，其中1,8-桉叶油素含量较高，为2.2％。
7、采用GC-MS固相微萃取对两种方法得到的蜂胶提取物进行黄酮组分及含量的分析，结果表明，乙醇超声波提取蜂胶中含有柏木烯、α-衣兰油烯、愈创木烯、甲位桉叶烯、姜烯、ar-姜黄烯、香橙烯、去氢白菖烯、α-白菖考烯、大茴香醛、子丁香烯、巴伦西亚桔烯、香兰素等黄酮类化合物，其中柏木烯、去氢白菖烯、子丁香烯含量较高。蜂胶超临界萃取物中含有柏木烯、α-衣兰油烯、甲位桉叶烯、ar-姜黄烯、去氢白菖烯、α-桉叶油醇、桉叶油醇、乙位桉叶油醇、香兰素、α-香柑油烯、乙位藿香烯、乙位桉叶烯、丁位杜松烯、白菖油萜、4-乙烯基儿茶酚等黄酮化合物，其中α-桉叶油醇、乙位桉叶油醇含量较高。
8、以木犀草素、高良姜素、芹菜素、山奈酚、杨梅酮、柯因、芦丁、桑色素、槲皮素九种黄酮为标准品，采用HPLC对两种方法得到的蜂胶提取物进行黄酮组分及含量的分析，结果表明：蜂胶乙醇超声波提取物中有7种与测试标品相同成分的黄酮类化合物，7种黄酮类化合物总量为16.32％，其中高良姜素、柯因、槲皮素的含量较高，分别为4.91％、5.59％、4.01％。木犀草素、芹菜素、山奈酚的含量较少。蜂胶超临界萃取物中只含有高良姜素1.71％、柯因1.46％。
9、通过五种不同的体系(油脂抗氧化、DPPH、羟基自由基·OH、亚硝酸盐(N02-)、还原能力）研究了两种蜂胶黄酮提取物的抗氧化性能。结果表明：蜂胶乙醇超声波提取物和超临界萃取物在五种体系中都具有一定的抗氧化性能，而且随着浓度的增加而增强。
10、两种方法提取蜂胶氨基酸含量都较低，分别为0.076％和0.026％。
11、蜂胶乙醇超声波提取物和超临界萃取物残留铅含量均小于0.05mg/kg，符合食品法规中的限定要求。
- 作者：
- 王正
- 学位授予单位：
- 上海海洋大学
- 专业名称：
- 应用化学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2008年
- 导师姓名：
- 周小理
- 中图分类号：
- O623.52
- 关键词：
- 抗氧化活性；超声波提取；黄酮成分；蜂胶提取物
- popolis；favonoids；spercritical extraction；etraction；HPLC；GC-MS；atioxidant