热休克因子1负调控热诱导的自噬的研究
热休克反应是以合成大量热休克蛋白为特征的细胞应激反应，在几乎所有生物中均存在；自噬是对细胞内蛋白质和细胞器进行自我消化的现象，是真核生物中普遍存在的一种保守的细胞行为。在许多肿瘤中发现热休克蛋白水平增高和自噬水平下降，并且都与肿瘤的发生和治疗有密切关系。但是热休克反应与自噬之间的关系尚不清楚。我们在实验中发现，热处理可以激发自噬，并研究了热休克因子1(HSF1)对自噬的调节作用。
本研究发现，在哺乳动物细胞中热处理可以诱发自噬。在电子显微镜下，热处理可以诱导细胞出现大量自噬性空泡状结构；在稳定表达GFP-LC3融合蛋白的细胞中，热处理后细胞质内出现大量绿色亮点，表明细胞内有大量自噬体形成；免疫印迹检测显示，热处理使细胞内的LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白水平均增加；RT-PCR检测显示，热处理后LC3基因mRNA水平也明显上升。
我们通过调节HSF1的活性来进一步研究热休克反应与自噬的关系。通过RNA干扰下调HSF1的表达水平，发现稳定表达GFP-LC3融合蛋白的细胞中绿色亮点增加，热处理后绿色亮点增加更加明显；免疫印迹显示，细胞内LC3-Ⅱ的基础水平和热处理后的水平均明显增加。通过转染组成型活性的HSF1，稳定表达GFP-LC3融合蛋白的细胞中绿色亮点减少，热处理后绿色亮点减少更加明显；细胞内LC3-Ⅱ蛋白的基础水平和热处理后的水平均明显减少。
以上结果表明，热处理能有效诱导自噬的发生；HSF1是自噬发生的负调控因子。为研究细胞在热应激情况下热休克反应与自噬之间的关系提供了实验基础；为基于热休克反应和自噬的药物开发提供了新的线索。
- 作者：
- 赵远波
- 学位授予单位：
- 中国科学院广州生物医药与健康研究院
- 专业名称：
- 生物化学与分子生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2008年
- 导师姓名：
- 邹江英
- 中图分类号：
- Q591.2；Q756
- 关键词：
- 热休克反
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