培养条件对丹参悬浮细胞中几种活性成份含量的影响
以丹参(Salviamiltiorrhiza)幼叶为外植体诱导愈伤组织,筛选出生长迅速、松散易碎的愈伤组织制备悬浮细胞,获得了较为稳定的悬浮细胞系,并对影响悬浮细胞生长和其有效成分含量的一些因素进行了研究,本结果为丹参的大规模培养提供了基础数据。主要研究内容和结果如下:
1、以丹参幼嫩叶为外植体,接种于附加2,4-D、NAA、6-BA及其组合的MS固体培养基上,研究外源激素对丹参愈伤组织诱导和生长的影响。结果表明:单独使用三种植物生长调节物质在一定浓度范围内均诱导产生愈伤组织；MS+2,4-D0.5mg/L为丹参愈伤组织诱导的最佳培养基；MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D0.5mg/L为最佳增殖培养基；低浓度的2,4-D对丹参愈伤组织的诱导有促进作用,但浓度过高时有抑制作用。
2、将筛选出的疏松易碎、长势旺盛、颜色鲜黄的愈伤组织接入液体培养基中,研究激素、接种量、碳源、温度及基本培养基等因素对悬浮细胞生长及次生代谢物合成的影响。结果表明:MS+2,4-D0.5mg/L有利于丹参悬浮细胞的生长,6,7-V+2,4-D0.5mg/L有利于丹参悬浮细胞水溶性酚酸的合成；接种量为60g/L；培养温度为24℃；丹参细胞能有效的利用蔗糖并得到较高的丹参酚酸产量；丹参悬浮细胞的生长周期约为18d,在16d时收获细胞可得到最高的生物量和次生代谢物含量。
3、培养第10d加入诱导子及组合,第16d收获细胞,研究诱导子及其组合对丹参细胞生长及次生代谢物生成的影响。结果表明:过氧化氢、草酸、水杨酸、酵母提取物及其组合均对细胞生长有不同程度的抑制作用；过氧化氢对丹参酚酸和丹参酮的生成均有促进作用,其中10μmol/L的过氧化氢处理的细胞中丹参酚酸含量达到最大值94.85mg/g干重,为对照组的2.43倍；草酸处理对丹参酚酸的生成具有促进作用,但对丹参酮的生成具有抑制作用；1μmol/L的水杨酸处理得到最高的丹参酮含量1.53mg/g干重;酵母提取物及其组合处理在本实验浓度范围内对上述两种成分的促进作用不明显。
- 作者：
- 杨芳
- 学位授予单位：
- 大连工业大学
- 专业名称：
- 发酵工程
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2008年
- 导师姓名：
- 张宗申
- 中图分类号：
- S567.59
- 关键词：
- 丹参；愈伤组织；悬浮细胞；丹参酚酸；丹参酮；诱导子
- Salvia miltiorrhiza； callus； suspension cell； depsides； tanshinone； elicitor