柴胡皂苷酶水解特性的研究
本文筛选柴胡皂苷糖苷酶生产菌为目标,主要研究真菌sp.c42、韩国庆熙大学校提供的细菌(Microbacteriumsp.GS514-saiko)和韩国KAIST提供的新细菌(Rhodanobactersp.GS3054等四种菌)的发酵、所产生酶对柴胡皂苷以及人参皂苷和淫羊藿苷糖基水解性能。
真菌sp.c42选用槐花为诱导物,28℃理想发酵培养5天,所产柴胡皂苷酶通过DEAE-Cellulose离子交换柱进行分离纯化,纯化后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验测得其为单带,分子量约为59KD,与上届研究生富瑶瑶59KD的结果基本相同。
分子量约为59KD的酶(第16管)能水解柴胡皂苷糖基,分子量约为57KD(第21管)的酶水解人参二醇类皂苷(PPD)；最适反应温度均为40℃；最适pH均为5,三种金属离子Ca2+、Mg2+、Zn2+对PPD为底物时的酶反应基本没有影响,而以柴胡作为底物时Ca2+、Mg2+离子具有促进酶反应作用,Zn2+无促进作用。
将细菌sp.GS514所产粗酶,能把Rbl转化为Rd、Rg3、Rh2；也能水解柴胡皂苷糖基。但是,其酶经DEAE-cellulose阴离子纤维素柱交换层析分离得到的酶,活力降低很大,只能人参皂苷Rb1转化为Rd,对0.2％柴胡皂苷只能水解10％；进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,有两条蛋白带,其分子量分别为67KD和59KD。说明它在保存及分离过程中酶活力降低,有待于进一步的研究。
细菌sp.GS3054的发酵液对水解柴胡皂苷能力较低,但是浓缩到1/5时,其酶活力很高；有0.04％芦丁诱导物时产柴胡皂苷酶很高；而且,该菌也产淫羊藿苷酶;发酵条件为在25℃,发酵时间6天。
对柴胡皂苷酶而言,真菌sp.c42似乎好于上述细菌；但是细菌sp.GS514所产的酶对人参皂苷PPD转化成Rg3和Rh2有意义；细菌Rhodanobactetersp.GS3054不仅对柴胡皂苷水解能力强,也能水解淫羊藿苷,有待于进一步探讨。
- 作者：
- 徐金丽
- 学位授予单位：
- 大连工业大学
- 专业名称：
- 发酵工程
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2008年
- 导师姓名：
- 金凤燮
- 中图分类号：
- Q556.2；Q814
- 关键词：
- 柴胡皂苷酶；糖基水解；真菌；细菌
- Saikosaponinase； Hydrolyzing of sugar-moiety； Fungi； Bacteria