抑菌肽产生菌的筛选及产物特性研究
乳酸菌能产生包括细菌素、有机酸、过氧化氢和双乙酰等在内的多种抗菌物质,在食品防腐上起到重要作用。本文采用牛津杯定量扩散法检测发酵上清液的抑菌活性,旨在筛选和鉴定高产广谱细菌素的菌株、优化发酵条件并测定所产细菌素的抑菌特性。
从传统发酵制品中分离出56株乳酸菌,经过初筛共有27株能够抑制金黄色葡萄球菌AS1.72、大肠杆菌AS1.543和枯草芽孢杆菌AS1.308的生长。在排除有机酸及过氧化氢的干扰后,从中筛选出抑菌活性较高的菌株P-347,经常规生理生化实验及多糖发酵实验,鉴定菌株P-347为短乳杆菌(Lactobacillusbrevis)。其发酵上清液经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后抑菌活性丧失,证明发酵液中含有蛋白质性质的抑菌物质,即细菌素。
测定菌株P-347发酵产细菌素的动态曲线得出,其在MRS培养基中于30℃培养24h时,发酵上清液的抑菌活性达到最高(抑菌圈直径为26.5mm)。单因素实验结果表明在以2％葡萄糖为碳源,1％酪蛋白胨为氮源,培养基起始pH6.5,在30℃～37℃培养24h时发酵上清液的抑菌活性达到最高(抑菌圈直径为32.5mm)。此外,菌株P-347与单增李斯特菌CMCC34005混合培养可提高细菌素产量。
菌株P-347所产细菌素有较好的热稳定性(100℃,2h不失去抑菌活性),其显示抑菌活性的pH值范围为pH2.0～6.0,2～8％(v/v)的乙醇、2～6％(w/v)的NaCl及0.5～1.5％(v/v)的表面活性剂SDS、Tween20、Tween80和尿素对其抑菌活性无影响,而8％(w/v)的NaCl会降低其抑菌活性。随保藏时间的延长,细菌素的抑菌活性有所降低,但低温(-20～4℃)对抑菌活性无影响。细菌素可抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长,但对霉菌和酵母菌的生长没有任何抑制作用。
- 作者：
- 李悦
- 学位授予单位：
- 大连工业大学
- 专业名称：
- 发酵工程
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2008年
- 导师姓名：
- 孙玉梅
- 中图分类号：
- TQ920.1；TQ927
- 关键词：
- 乳酸菌；细菌素；筛选；鉴定；发酵；特性
- Lactic acid bacteria； bacteriocin； screen； identification； fermentation； characteristics