丙戊酸钠对烫伤休克大鼠生命维持作用与机制研究
目的:1.建立50％TBSAⅢ°烫伤休克大鼠实验模型；2.研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸钠(VPA)对烫伤休克大鼠生存时间和脏器功能的影响；3.研究HDAC抑制剂的作用机制:着重研究其对大鼠心肌HDAC1、热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。
方法:1.烫伤休克模型制作雄性SD大鼠,体重220～250g,氯胺酮+速眠新Ⅱ麻醉后,大鼠颈、背部、腹部及双下肢备皮,后水浴烫伤,水温80℃,背部15秒、双下肢15秒、腹部8秒,造成50％TBSAⅢ度烫伤。后无菌术消毒皮肤,右侧颈总动脉置人心功能监护仪感应导管,监测大鼠平均动脉压变化。2.实验分组与处理120只雄性SD大鼠,随机分为:①假烫组、②烫伤组、③烫伤+2M2P组、④烫伤+VPA组。③④组于烫伤后即刻皮下注射2M2P(300mg/kg)、VPA(300mg/kg)。各组大鼠分别于烫伤后2h、6h及12h,腹主动脉取血；后处死大鼠,胸正中线剖开取心,标号冻存备用。对②③④组取血前死亡大鼠,记录生存时间,纳人生存分析。3.指标检测与方法腹主动脉采血后,全自动生化分析仪测定血浆CK-MB、ALT及Cr指标变化,ELISA试剂盒检测大鼠血清HSP70含量。HE染色观察大鼠心肌组织病理变化；Western blot检测大鼠心肌组织HDAC1.表达；免疫组织化学法检测大鼠心肌细胞中HSP70表达。
结果:1.烫伤休克表现大鼠烫伤面积均在50％左右,背部、腹部及双下肢烫伤部位皮革状、创面发白、松弛,随后出现溃疡或结痂现象,均达到Ⅲ°烫伤。烫伤后2h,大鼠平均动脉压迅速下降至50mmHg左右,维持约4小时左右,于烫伤后6h左右,平均动脉压再次快速下降,随后多数大鼠死亡。2.生存时间烫伤后大鼠生存时间:烫伤组349.5±17.9min,12h生存率为0；2M2P组521.5±32.6min,12h生存率约为20％,可一定程度延长烫伤休克大鼠生存期；VPA组为700.0±66.17min,12h生存率约为60％,可明显延长烫伤休克大鼠生存时间(P<0.01,Kaplan-meier生存分析)。3.脏器功能与假烫组相比,烫伤组(②组)、2M2P组(③组)大鼠血浆CK-MB、Cr、ALT水平持续升高,②③组间无差异；与同时间点②③组相比,VPA组(④组)血浆CK-MB、Cr水平显著改善,血浆ALT水平趋势上低于②③组,但无统计学意义。4.心肌组织病理学变化病理切片观察显示:随时间变化,烫伤后大鼠心肌损伤逐渐加重；相同时间点,④组大鼠心肌损害较②③组损伤较轻；随时间变化,④组大鼠心肌损害虽进行性加重,但病理变化相对迟缓,损伤出现时间晚于②③组大鼠。5.心肌HDAC1表达Western Blot检测显示:VPA组大鼠心肌HDAC1表达明显低于烫伤组与2M2P组；2M2P组心肌HDAC1.表达低于烫伤组。6.心肌、血清HSP70变化免疫组化显示:与假烫组相比,烫伤组心肌HSP70表达略有增加；2M2P组HSP70表达总体趋势上高于烫伤组,但无统计学差异；VPA组HSP70表达明显高于烫伤组与2M2P组。ELISA显示:与假烫组相比,烫伤组、2M2P组与VPA组大鼠血清HSP70含量持续上升,至6h达到高峰,三组变化基本一致,组间无差异。
结论:1.VPA显著延长烫伤休克大鼠生存时间,提高烫伤休克大鼠12h存活率,显著改善脏器功能,减轻心肌病理损伤。2.2M2P、VPA对HDAC1均有一定的抑制作用,VPA的抑制作用强于2M2P。此外,VPA尚能使大鼠心肌HSP70表达增加。3.VPA的作用机制可能与其抑制HDAC活性,影响组蛋白乙酰化水平,促进保护性蛋白HSP70表达增多有关。4.对烫伤休克大鼠的脏器功能分析显示,短期使用VPA安全性良好。
- 作者：
- 白慧颖
- 学位授予单位：
- 内蒙古医学院
- 专业名称：
- 病理学与病理生理学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2010年
- 导师姓名：
- 冀文茹
- 中图分类号：
- R631.4；R979.5
- 关键词：
- 丙戊酸钠；HDAC抑制剂；烫伤；致死性休克；生命维持；组蛋白去乙酰化；热休克蛋白
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