用人骨髓间充质干细胞筛选人类抗砷相关基因
目的：长期低剂量亚砷酸钠诱导人骨髓间充质干细胞，从而建立抗砷细胞模型，筛选人类抗砷相关基因。 方法：常规条件下分离培养人骨髓间充质干细胞，检测部分生物学特性；实验组用1 μmol/L的亚砷酸钠诱导)14周，对照组不加砷剂平行培养；48小时急性砷毒性试验检测细胞生存率；免疫荧光染色及荧光激活细胞分选术鉴定诱导前后细胞表面分子；流式细胞术进行细胞周期及凋亡检测；实时定量PCR检测不同诱导时间金属硫蛋白MT1E、多药耐药蛋白基因MRP1、人类抗砷相关基因HARRG的表达丰度；软琼脂试验检测细胞是否发生恶性转化；实验组细胞获得抗砷性之后，抽提并纯化实验组和对照组细胞总RNA，分别与Affymetrix UC133 plus 2.0 cDNA表达谱芯片杂交，生物信息学分析差异表达基因并初步进行功能分类。 结果：低剂量亚砷酸钠急性刺激能够促进人骨髓间充质干细胞增殖，长期诱导则表现为抑制细胞生长：1 μmol/L，的亚砷酸钠诱导骨髓间充质干细胞10周后细胞初步表现出了抗砷性，14周后抗性较明显。人骨髓间充质干细胞砷诱导后表型无明显变化，而细胞周期的变化较大，急性刺激期G2/M期和S期细胞增加，G0/G1期细胞减少，适应后细胞周期恢复至诱导前水平：长期1 μmol/L亚砷酸钠诱导不引起人骨髓间充质干细胞发生凋亡，超过5 μmol/L急性刺激则能够诱导其凋亡；人骨髓间充质干细胞砷诱导一定时期内MTlE、MRP1、HARRG表达增高，并呈动态变化趋势；长期砷诱导后人骨髓间充质干细胞在双层软琼脂上不能克隆化生长，没有发生恶性转化。细胞获得抗砷性后与Affymetrix UC133 plus 2.0基因表达谱芯片杂交，筛选出差异表达基因1876条，其中上调表达基因1120条，下调表达基因756条。 结论：长期低剂量砷诱导人骨髓间充质干细胞能够使其产生抗砷性，筛选出差异表达基因1876条。
- 作者：
- 冉玉琴
- 学位授予单位：
- 石河子大学
- 专业名称：
- 人体解剖与组织胚胎学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2007年
- 导师姓名：
- 慕晓玲
- 中图分类号：
- R457.7
- 关键词：
- 骨髓间充质干细胞；抗砷性；基因芯片；细胞周期
- human Bone marrow Mesenchymal Stem Cells；arsenic resistance；gene microarray；cell cycle
- 基金项目：
- 国家自然科学基金