2005-2006年鸡传染性支气管炎病毒中国分离株分子流行病学研究
本研究从我国8个省市分离或收集到2005-2006年间的12株IBV病毒，并对其生物学特性进行了研究，以说明我国IBV毒株之间以及与参考毒株之间基因的遗传变异情况及系统进化关系，同时阐明我国IBV的基因型，探讨我国IB流行的背景和原因。 采取现地濒死病鸡病变组织处理后，经鸡胚尿囊腔接种9-11日龄SPY鸡胚，收集72h尿囊液，同时观察胚体病变，通过致SPF鸡胚病变特征、病毒对鸡外周血红细胞凝集特性、病毒粒子形态学特征等方面的研究，结果发现，鸡胚传毒传2-8代后，死亡鸡胚表现出生长发育障碍，胚体弥漫性出血，未死亡鸡胚呈现典型的卷曲胚；病毒尿囊液不凝集鸡的外周血红细胞；在电镜下呈球形，病毒囊膜表面有疏松排列的棒状纤突，具有冠状病毒粒子的形态特征，未发现有其它病毒粒子的存在。所以可初步断定本研究所分离的病毒为鸡传染性支气管炎病毒。 本研究应用RT-PCR方法扩增到了我国2005-2006年8个省市的12株IBV现地分离株的S1和部分N蛋白基因，并将其进行了克隆、序列测定及分析，为了说明我国IBV毒株之间以及与参考毒株之间基因的遗传变异情况，同时构建了系统进化树，分析了我国IBV分离株与参考毒株之间的系统进化关系。 通过S1基因系统进化树分析发现，本实验中所分离的8株IBV毒株与分布于同一群内的我国分离毒株LX4具有较高的同源性(95.3-97.0﹪)，并且此群毒株间的S1基因推导氨基酸序列具有较高的同源性(>91﹪)，亲缘关系较近，而与我国目前用于IB预防的主要活疫苗H120属于不同的基因型且氨基酸序列同源性较低(≤8O.1﹪)，这可能是导致IB疫苗免疫失败或只能产生部分免疫保护作用，以致IB在鸡群中不断发生的主要原因之一；还发现，毒株CK/CH/LSD/05I可能为一变异毒株。结合S1及N基因系统进化树分析可知：在S1基因系统进化树分析中，毒株CK/CH/LDL/05I、CK/CH/LNM/05I和CK/CH/LGX/06I与毒株tl/CH/LDT3/03属于同一进化群，并且此三个毒株具有较高的氨基酸同源性，同时，此三个毒株具有相同的插入和缺失位点，具有相似的纤突蛋白裂解位点，然而经过N基因系统进化树分析得知，毒株CK/CH/LNM/05I和CK/CH/LGX/06I与毒株CK/CH/LDL/05I和tl/CH/LDT3/03的N基因属于不同的基因进化群；此外还发现，毒株CK/CH/LSD/05I与疫苗株H120的N基因同源性最高(93.4﹪)。以上分析表明毒株CK/CH/LSD/05I可能是在ID疫苗免疫选择压力下所产生的变异毒株；毒株CK/CH/LNM/05I和毒株CK/CH/LGX/06I可能发生了基因重组；同时，以疫苗株H120作为参考毒株，分析发现，12株IBV分离株在S1蛋白基因的HVR1和HVR2高变区内含有较多插入和缺失现象；N基因及其局部功能区序列存在广泛的氨基酸替代现象。 以上分析结果表明，我国IBV分离株存在较为广泛的基因突变、插入和缺失，同时，IBV毒株间的基因重组也可能是我国IBV变异株产生的另一主要原因。 经S1基因系统进化树分析发现，本实验所分离的大多数IBV毒株(8/12)分布于同一基因进化群内，并且亲缘关系较近，因此，我们对此群中IBV毒株CK/CH/LDL/05Ⅱ的致病性进行研究，以10<''5.5>×EIDsd<,500>/0.1ml的病毒接种15日龄的SPF雏鸡,鸡群发病率为22/22(100﹪)，死亡率为12/22(54.5﹪)，死亡鸡以肾脏肿大、苍白、外观呈现典型的“花斑肾”，肾小管和输尿管扩张并且有尿酸盐沉积为主要病理变化。
- 作者：
- 马亚珍
- 学位授予单位：
- 新疆农业大学
- 专业名称：
- 预防兽医学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2007年
- 导师姓名：
- 刘胜旺；冉多良
- 中图分类号：
- S854
- 关键词：
- 鸡传染性支气管炎病毒；中国分离株；纤突蛋白基因；遗传变异
- Avian infectious bronchitis virus；Chinese IBV isolates；Spike protein gene；Genetic variation
- 基金项目：
- 国家科技支撑计划