乌苏里藜芦生物碱单体成分计米丁的抗血栓药效学研究

目的：计米丁是从乌苏里藜芦生物碱(VnA)中分离提纯的单体成分之一。本实验旨在研究计米丁的抗栓降粘作用及其对血小板聚集及凝血时间和出血时间的影响。 方法和结果： 一、静脉注射计米丁半数致死量(LD<,50>)的测定：取小鼠50只，随机分成5组，每组10只。受试药物组动物分别尾静脉匀速推注4种浓度(5.22，6.14，7.23，8.50 mg.kg<''-1>)的计米丁注射液，空白对照组动物给以等容量NS，用Bliss法计算得小鼠静脉注射计米丁的LD<,50>为6.6619 mg.kg<''-1>，其95﹪可信限为5.6120 mg.kg<''-1>～7.9080 mg.kg<''-1>。 二、对电刺激大鼠颈动脉血栓形成的影响：取SD大鼠，按电刺激法造成颈动脉血栓模型，观察计米丁对血管堵塞时间(OT)的影响，并作量效关系分析。结果表明，与NS阴性对照组相比，计米丁1.25μg.kg<''-1>、2.50μg.kg<''-1>、5.00μg.kg<''-1>、10.00μg.kg<''-1>和20.00μg.kg<''-1>组iv后OT延长百分率分别为16.4﹪(P<0.05)、27.3﹪、33.8﹪、43.9﹪及66.0﹪(P<0.01)；阳性对照药LAS(赖安匹林) 18.0mg.kg<''-1> iv后OI、延长百分率为52.3﹪(p<0.01)。 三、对大鼠下腔静脉血栓形成的影响：取SD大鼠，随机均分为7组：NS阴性对照组，肝素400.0μg.kg<''-1>阳性对照组，计米丁1.25μg.kg<''-1>、2.50μg.kg<''-1>、5.00μg.kg<''-1>、10.00μg.kg<''-1>和20.00μg.kg<''-1> iv组。按Rayer氏法造成大鼠下腔静脉血栓形成模型，观察各组对血栓形成率和血栓干重的影响。结果表明，与NS组相比，计米丁1.25μg.kg<''-1>、2.50μg.kg<''-1>、5.00μg.kg<''-1>、10.00μg.kg<''-1>和20.00μg.kg<''-1>iv后血栓干重抑制率分别为7.0﹪(P>0.05)、58.8﹪、70.4﹪、72.9﹪和83.0﹪(P<0.01)：阳性对照药肝素400.0μg.kg<''-1>iv后的血栓干重抑制率为85.0﹪(p<0.01)。 四、对大鼠血小板聚集的影响1.对大鼠体外血小板聚集的影响：取SD大鼠，心脏采血，按常规制备富血小板血浆(PRP)和贫血小板血浆(PPP)。以ADP(终浓度为3μmol/L)为血小板聚集诱导剂。按Born氏法(比浊沉淀法)测定血小板5min最大聚集率。结果表明，与NS组相比，计米丁终浓度6.25 gg/L、12.50μg/L、25.00gg/L和50.00μg/L对血小板聚集抑制率分别为19.39﹪、33.55﹪、46.14﹪和61.26﹪；终浓度40.0mg/L的LAS对血小板聚集抑制率为42.23﹪。 2.对大鼠体内血小板聚集的影响：取SD大鼠，随机均分为6组：NS阴性对照组，LAS 18.0mg.kg<''-1> 阳性对照组以及计米丁2.50μg．kg<''-1>、5.00gg．kg<''-1>、10.00gg．kg叫和20.00μg.kg<''-1>组，按4.1项下方法测定血小板5min最大聚集率。结果表明，与NS组相比，计米丁2.50gg.kg<''-1>、5.00μg.kg<''-1>、10.00μg.kg<''-1>和20.00μg.kg<''-1>iv后抑制血小板聚集率分别为22.67﹪、39.87﹪、47.39﹪和62.93﹪(P<0.01)：阳性对照药LAS 18.0mg.kg<''-1>iv后抑制血小板聚集率为47.21﹪(p<0.01)。 五、对小鼠凝血时间的影响：取昆明种小鼠，随机均分为7组：NS阴性对照组，肝素1.25mg.kg<''-1>阳性对照组，计米丁1.25gg.kg<''-1>、2.50μg.kg<''-1>、5.00μg.kg<''-1>、10.00μg.kg<''-1>和20.00μg.kg<''-1>组，测定小鼠全血凝血时间(CT)，以NS组为基准计算各给药组CT延长百分率。结果表明，计米丁1.25μg.kg<''-1>、2.50μg.kg<''-1>、5.00μg.kg<''-1>、10.00μg.kg<''-1>和20.00μg.kg<''-1>iv后血栓CT延长百分率分别为-0.81﹪(P>0.05)、119.14﹪、159.92﹪、228.74﹪和195.14﹪(P<0.01)，阳性对照药肝素1.25mg.kg<''-1>iv后CT延长61.13﹪(p<0.01)。 六、对小鼠尾出血时间的影响：取昆明种小鼠，随机均分为6组：NS阴性对照组，肝素1.25mg.kg<''-1>阳性对照组，以及计米丁1.25 μg.kg<''-1>、2.50μg.kg<''-1>、5.00μg.kg<''-1>和10.00μg.kg<''-1>组，按断尾法观察小鼠尾出血时间(BT)，以NS组为基准计算各给药组BT延长百分率。结果表明，计米丁1.25μg.kg<''-1>、2.50μg.kg<''-1>、5.00μg.kg<''-1>、10.00μg.kg<''-1>iv后血栓BT延长率分别为47.13﹪、58.05﹪、121.84﹪和105.17﹪(P<0.01)，阳性对照药肝素1.25mg.kg<''-1>iv后BT延长78.16﹪(p<0.01)。 七、对家兔血液流变学的影响：取家兔，随机均分为4组，分别耳缘静脉注射计米丁1.25μg.kg<''-1>、2.50μg.kg<''-1>、5.00μg.kg<''-1>和10.00μg.kg<''-1>，测定全血粘度和血浆粘度，以药前为基准计算给药后各时间点血液流变学参数的变化。结果表明，计米丁1.25μg.kg<''-1>、2.50μg.kg<''-1>、5.00μg.kg<''-1>、10.00μg．kg<''-1>iv后均可明显降低全血粘度和血浆粘度(P<0.05或P<0.01)。结论：计米丁具有强大的抗实验性动、静脉血栓作用；计米丁抗栓作用与其抑制血小板聚集、降低血粘度、抗凝作用有关；计米丁是vnA抗实验性动、静脉血栓形成作用，抑制血小板聚集、降低血粘度、抗凝等作用的重要活性成分。