人小细胞肺癌中GRP78/94的表达与VP16耐药的相关性及其机制
目的：采用免疫荧光细胞化学，RT-PCR和流式细胞术等方法检测人小细胞肺癌细胞株NCI-H446中葡萄糖调节蛋白78/94(GRP78/94)的表达与VP16诱导的细胞耐药的相关性及其机制。 方法：将细胞分为诱导组(加入A23187)，抑制组(加入BAPTA-AM)和对照组(加入PBS)，分别对细胞进行培养。．采用免疫荧光细胞化学的方法检测细胞中GRP78/94的表达及分布，采用RT-PCR方法在核酸水平检测 GRP78/94的表达并比较各组细胞间的表达差异，采用流式细胞仪对细胞进行周期分析。向各组细胞中加入相同浓度的化疗药物 VP16，采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率，比较GRP78/94的表达与NCI-H446细胞对 VP16 耐药的相关性。 结果：免疫荧光细胞化学结果显示：在NCI-H446细胞中可以检测到GRP78/94蛋白的表达，主要分布在细胞质及核周，并且诱导组较对照组的荧光强度明显增强。RT-PCR的结果显示：在核酸水平可检测到GRP78/94，而且诱导剂或抑制剂对其表达水平有影响，并呈现一定的浓度依赖关系，即随着诱导剂或抑制剂浓度的提高，GRP的表达增多或减少。细胞周期分析显示：诱导组细胞大多分布于G1期，S期和G2期相对减少，而抑制组G1期细胞减少，S、G2期相对增多。应用主要作用于S期和G2期的化疗药物VP16后，与对照组相比，诱导组的凋亡率明显降低，而抑制组明显升高，表明GRP78/94可能通过影响细胞的周期分布产生耐药性。 结论：本研究表明，NCI-H446细胞的胞质及核周存在 GRP78/94 的表达，诱导剂(A23187)或抑制剂(BAPTA-AM)能够使GRP78/94 的表达增多或减少。而且GRP78/94的表达水平影响细胞的周期分布，并与VP16诱导的细胞凋亡有关。GRP78/94可能是通过影响细胞周期，发挥对小细胞肺癌细胞的耐药作用，抑制其表达可能成为降低小细胞肺癌耐药性，提高对化疗药物敏感性的一条重要途径
- 作者：
- 王伟
- 学位授予单位：
- 大连医科大学
- 专业名称：
- 内科学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2007年
- 导师姓名：
- 王琪
- 中图分类号：
- R734.2
- 关键词：
- 糖调节蛋白；NCI-H446；VP16；细胞耐药
- glucose-regulated proteins (GRP78/94)；NCI-H446；VP-16；Chemotherapy resistance