微管相关蛋白2基因对恶性黑素瘤增殖及侵袭影响的研究
恶性黑素瘤简称恶黑，是源于黑素细胞、痣细胞的一种恶性程度较高的肿瘤，多发生于皮肤。近年来，基因治疗为恶黑患者带来了新的希望。 近期有研究发现神经标记物微管相关蛋白-2(MAP2)在色素痣、恶黑的早期放射状生长阶段和垂直生长阶段的细胞内高表达，而在转移性恶黑细胞内弱表达或表达缺失。宋智琦等研究发现，体外MAP2超表达可使类椭圆形的恶黑细胞树突明显变长、变细、延伸，恢复正常黑素细胞树枝状形态；同时，细胞树突内微管明显变长、变粗、微管聚集成束数量增多，MAP2体外对鼠侵袭性恶黑细胞B16C29及人转移性恶黑细胞WM451Lu生长具有抑制作用。 由此推测MAP2的表达可能与恶黑的增殖及侵袭有关，并在此基础上进行进一步的实验研究，探讨体外及体内MAP2的表达对恶黑的影响及其作用机制。本研究目的是探讨MAP2基因对恶黑增殖及侵袭的影响。材料和方法1.应用人胚肾HEK293细胞作为包装细胞，分别扩增携带MAP2cDNA及绿色荧光蛋白(GFP)cDNA表达片段的腺病毒-微管相关蛋白2载体(Ad-MAP2)及腺病毒-绿色荧光蛋白载体(Ad-GFP)应用病毒空斑试验检测病毒滴度。 结果1.分别获得了100μl纯化病毒液，病毒滴度达2.42×108～4.0×1010pfu/ml；B16C29细胞内未检测到MAP2基因的表达；转染后WM451Lu及B16C29细胞内MAP2表达显著；MTT方法检测示MAP2体外抑制WM451Lu及B16C29细胞增殖；细胞分裂停滞于G2/M期，与对照组比较，Ad-MAP2治疗组及紫杉醇治疗组瘤体增长缓慢；免疫组化检测到恶黑瘤组织中HMB45、S100及MAP2表达显著；2.体外转染MAP2抑制WM451Lu及B16C29细胞的侵袭力(P＜0.05)；电镜下见转染MAP2后瘤组织内微管含量增加，微管交长、变粗。 结论1.MAP2体外对鼠侵袭性恶黑细胞B16C29及人转移性恶黑细胞WM451Lu的生长具有抑制作用MAP2体内超表达亦可抑制恶黑肿瘤的生长。2.MAP2超表达可使鼠侵袭性恶黑细胞B16C29及人转移性细胞WM451Lu的分裂周期停滞于G2/M期。其发生机制可能与MAP2干扰细胞有丝分裂干预细胞周期的调控有关。3.MAP2体外超表达可降低恶黑细胞的侵袭力，而其发生机制可能与细胞内微管性状的改变有关。4.MAP2体内超表达，细胞树突内微管明显变长、变粗、微管聚集成束数量增多，进一步验证了体外实验的结果。
- 作者：
- 张怡
- 学位授予单位：
- 大连医科大学
- 专业名称：
- 皮肤病与性病学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2006年
- 导师姓名：
- 宋智琦
- 中图分类号：
- R739.5；R730.5
- 关键词：
- 恶性黑素瘤；微管相关蛋白2；腺病毒载体；微管蛋白；基因治疗
- malignant melanoma；Microtubule-associated protein2 microtubule；Adenovirus vector；proliferation invasion