OVCA1基因对人卵巢癌细胞系A2780细胞周期抑制的分子机制研究
目的:研究OVCA1基因对人卵巢癌细胞系A2780细胞内cyclinD1、p16、NF-κB的调节作用,探讨其是否通过调节cyclinD1的表达水平,发挥调节细胞周期、抑制肿瘤发生发展的作用,以及OVCA1基因通过那些直接或间接作用引起cyclinD1表达水平的变化,从而揭示OVCA1基因对A2780细胞的细胞周期抑制的分子机制。 方法:选用A2780细胞(人卵巢癌细胞系A2780)与A2780-OVCA1细胞(单克隆的稳定表达OVCA1基因的人卵巢癌细胞株A2780)进行体外培养,采用成集落的细胞培养试验检测OVCA1基因对A2780细胞增殖活性的影响;RT-PCR技术检测细胞内cyclinD1、p16的mRNA表达水平;免疫细胞化学技术检测细胞内cyclinD1、p16、NF-κB的蛋白表达水平,对细胞内cyclinD1、p16的蛋白表达同时采用免疫荧光技术进行检测。 结果:1.A2780-OVCA1细胞集落形成百分率为58.5040士3.8799﹪,A2780细胞集落形成百分率为78.8660士7.4908﹪,差异有统计学意义(P<0.01)。2.A2780-OVCA1细胞内cyclinD1的mRNA相对含量为0.9752±0.1055,A2780细胞内cyclinD1的mRNA相对含量为1.4154士0.1149,差异有统计学意义(P<0.01);A2780-OVCA1细胞内p16的mRNA相对含量为0.3562士0.0042,A2780细胞内p16的mRNA相对含量为0.1865士0.0111,差异有统计学意义(P<0.01)。3.A2780-OVCA1细胞中cylinD1的免疫细胞化学染色强度与免疫荧光染色强度均弱于A2780细胞,p16的两种染色强度均强于A2780细胞,通过平均光密度值比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。4.cyclinD1与p16的表达在mRNA水平与蛋白水平均不具有相关性(p>0.05)。5.OVCA1基因在mRNA水平及蛋白水平对A2780细胞内cyclinD1的抑制率无统计学差异(P>0.05);OVCA1基因对p16的上调率在mRNA水平为91.3944士2.4942﹪,蛋白水平为38.9152士2.8227﹪,差异有统计学意义(P<0.01)。6.两种细胞内NF-κB蛋白的表达总量、胞浆表达量、胞核表达量均没有统计学差异(P>0.05)。 结论:1.OVCA1基因对人卵巢癌细胞系A2780细胞的生长具有明显的抑制作用。2.抑制cyclinD1的mRNA表达是OVCA1基因抑制肿瘤细胞增殖的机制之一。3.OVCA1基因对cyclinD1的抑制机制与上调p16的mRNA表达有关,是否存在其他途径对cyclinD1进行调节尚待进一步研究。4.OVCA1基因对A2780细胞内cyclinD1的抑制作用不是通过调节NF-κB的蛋白表达来实现的。
- 作者:
- 佟锐
- 学位授予单位:
- 大连医科大学
- 专业名称:
- 妇产科学
- 授予学位:
- 硕士
- 学位年度:
- 2006年
- 导师姓名:
- 孔繁斗
- 中图分类号:
- R737.31;R730.23
- 关键词:
- 卵巢癌;细胞周期;OVCA1基因;细胞增殖
- OVCA1;ovarian cancer;cell;cycle cyclinD1;p16