利用抑制差减杂交(SSH)技术研究脂多糖诱导的点带石斑鱼功能基因
本研究首先以热酚水抽提法提取致病溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)强毒株HN08155和弱毒株HN08152的粗脂多糖(Lipopolysaccharidcs，LPS)；以弱毒株HN08152和大肠杆菌(Escherichia coli)LPS作对照，将不同浓度的溶藻弧菌强毒株HN08155粗LPS通过腹腔注射法接种点带石斑鱼(Epinephelus malabaricus)，通过测定死亡率和各组石斑鱼血液中白细胞吞噬活性、血清抗菌活性、溶菌活性和酚氧化酶活性等免疫指标，研究该LPS对点带石斑鱼的毒性和免疫保护力。结果表明，溶藻弧菌强毒株和弱毒株粗LPS均对石斑鱼具有比较强的毒性，溶藻弧菌LPS对石斑鱼的免疫保护力随LPS浓度的增高而增强，高纯度的大肠杆菌LPS对石斑鱼的免疫保护效果要优于溶藻弧菌粗LPS。
选用低浓度、高纯度大肠杆菌LPS刺激的石斑鱼头肾细胞cDNA为Tester组，注射PBS的对照组石斑鱼头肾细胞cDNA为Driver组，进行抑制差减杂交(SuppressionSubtraetive Hybridization，SSH)，构建cDNA文库。对阳性克隆进行测序并经生物信息学分析，共获得13种不同功能基因的克隆。其中免疫相关功能基因干扰素调节因子-2(irf2)、T-Complex protein 1-theta(tcp-1-theta)、40S核糖体蛋白S8(rpS8)和空泡蛋白分选(vps8)基因共4种；氧运输功能基因血红素-α链(alpha-chain Hb)、血红素-β链(beta-chain Hb)和铁蛋白重链(fhc)3种；转录、翻译调节功能基因有蛋白质翻译延伸延伸因子-2(Eef2)和胶原蛋白C的内肽酶增强子(pcpe)2种；代谢功能基因ct054 1种；其他功能基因有骨髓白细胞分化蛋白家族(Myeloid leukemia differentiation proteinhomologue)基因、斑马鱼基因库中编号为73290基因(zgc：73290)和未命名蛋白基因3种。
本研究首次研究了LPS对点带石斑鱼功能基因的诱导作用，成功获得的干扰素调节因子-2(Interferon regulatory factor-2，IRF2)基因，为阐明LPS的免疫保护作用提供了直接分子证据；本研究的结果还表明，多种氧运输功能基因的表达可能对提高石斑鱼的抗逆性具有重要作用。
- 作者：
- 徐先栋
- 学位授予单位：
- 海南大学
- 专业名称：
- 水产养殖
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2009年
- 导师姓名：
- 周永灿；谢珍玉
- 中图分类号：
- S943.334；S942.1
- 关键词：
- 点带石斑鱼；功能基因；抑制差减杂交技术；脂多糖；溶藻弧菌；免疫保护
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