三角帆蚌内脏团插核手术后免疫防御调节
三角帆蚌是我国特有的培育淡水珍珠的主要蚌种。随着淡水珍珠业的发展，三角帆蚌蚌病的频发，给育珠生产造成很大的经济损失。插核手术尤其是内脏团插核手术，操作时间长，造成的创伤口大，更增加了三角帆蚌疾病感染的风险率。如何增强三角帆蚌非特异性免疫系统，增加其抗病能力成为珍珠培育中的重要课题。三角帆蚌自身的免疫系统是其抵御外来病原生物入侵的屏障，主要依靠血细胞的吞噬和血淋巴中各种非特异的免疫活性因子的识别、调节和杀伤等作用。血细胞形态特征的鉴别是研究双壳类免疫学的基础。为了探讨内脏团插核手术后三角帆蚌免疫防御机制，本文从血细胞形态学，免疫相关酶活性和免疫相关基因表达，以及内脏团有核珍珠培育四个方面开展了研究。 利用相差显微镜、光学显微镜、透射电子显微镜和流式细胞仪对插核手术5d三角帆蚌血细胞进行了形态学研究，采用荧光定量RT-PCR方法和酶活测定方法研究了三角帆蚌插核手术后第1、2、3、5、10d免疫相关基因alpha-2巨球蛋白（α2M）的表达情况和免疫相关酶酸性磷酸酶（ACP）、超氧化物歧化酶（SOD）活性变化情况。流式细胞术光散射图谱显示血细胞被分两类，一类为颗粒度高的大细胞，另外一类为颗粒度低的小细胞；相差显微镜观察显示，血细胞可分为胞体暗、折光性差和胞体明亮、折光性强的两类；Giemsa和H.E染色显示细胞分为胞质染色不均一、胞内颗粒明显和胞质染色均一、胞内颗粒不明显的两类；透射电镜超薄切片观察显示，颗粒明显的细胞胞质内线粒体、高尔基体等细胞器较丰富，颗粒不明显的细胞胞质内细胞器较少；负染结果表明血细胞主要分为表面不光滑、突起明显和细胞表面光滑、突起较不明显的两类，综合上述实验结果，三角帆蚌血细胞从形态学可分为颗粒明显的细胞和颗粒不明显的透明细胞两大类。插核手术后，颗粒细胞数量相对增加，透明细胞数量相对减少，说明颗粒细胞发挥着主要免疫功能。并且血细胞表面形态更多样，伪足状突起更明显，细胞内囊泡状物质增多，血细胞密度显著增高（p<0.01），两类细胞所占比例的变化在相差显微镜观测中差异极显著（p<0.01）。α2M基因在手术后表达量增加，在第3、5d与对照组有显著性差异。血清和血细胞中ACP活性实验组均高于对照组，血清中ACP活性实验组与对照组有显著性差异，血细胞中ACP活性第1、2、3d有显著性差异。血清中SOD活性实验组均高于对照组，第3、5、10d有显著性差异，血细胞中SOD的活性实验组均低于对照组，第3d差异不显著，其余时间差异显著。 三角帆蚌内脏团有核珍珠培育的初步研究证实了细胞植入法内脏团有核珍珠培育的可行性。虽然施术贝在插核手术第10天时表现出很高的死亡率，但从尸检来看死亡原因主要是营养不良造成。而在插核手术第3-7天死亡率不高，这时间恰是血淋巴中的非特异性免疫活性因子增高期，证实了机体对插核手术产生的免疫防御反应。
- 作者：
- 何秀娟
- 学位授予单位：
- 上海海洋大学
- 专业名称：
- 水产养殖学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2009年
- 导师姓名：
- 施志仪
- 中图分类号：
- S966.221
- 关键词：
- 三角帆蚌；内脏团插核手术；珍珠培育；血细胞形态学；免疫防御反应
-