复合免疫增强剂组方的筛选及其抗免疫应激作用的研究

本研究通过淋巴细胞转化试验初步筛选出复合免疫增强剂的组方，然后通过饲养试验测定断奶仔猪的生长性能、血浆免疫指标和抗氧化指标，确定了一种复合免疫增强剂的组方，并应用大肠杆菌脂多糖（LPS）应激模型探讨了该复合免疫增强剂对断奶仔猪的血浆激素水平、炎性细胞因子水平及血浆免疫指标的影响。本研究分为四个试验： 试验一复合免疫增强剂组方的体外筛选试验为了筛选出免疫增强作用效果较好的中草药提取物复合组方，将黄芪多糖（APS）、淫羊藿多糖（EPS）、牛膝多糖（ABPS）和刺五加皂甙（ASS）按等质量比组成四种不同的复方制剂，分别为APS+EPS、APS+ASS、APS+ABPS+EPS和APS+ABPS+ASS，用不含胎牛血清的RPMI-1640 培养液配制成50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL 和800μg/mL 五种不同浓度的溶液，分别加入到培养的仔猪外周血液淋巴细胞中，培养72 小时，用MTT 法测定淋巴细胞增殖反应。结果表明：四种复方制剂在适宜浓度下均能促进ConA 或LPS 诱导的淋巴细胞增殖反应，且复方制剂APS+ASS 和APS+ABPS+ASS 的效果较好。 试验二复合免疫增强剂对断奶仔猪生长性能、免疫功能及机体抗氧化功能的影响为比较复方A（APS+ASS）和复方B（APS+ABPS+ASS）两种免疫增强剂的应用效果，试验选用来源相同、健康的平均体重为9.29±0.53kg、年龄为31±3d的大约克断奶仔猪32头，按体重随机分为4个日粮处理，每个处理4个重复（栏）每个重复（栏）2头仔猪。四个日粮处理组分别为对照组（基础日粮，不含抗生素）、黄芪多糖组（基础日粮+0.05％黄芪多糖）、复方A组（基础日粮+0.05％复方A免疫增强剂）和复方B组（基础日粮+0.05％复方B免疫增强剂）。试验仔猪用四种日粮饲喂，进行为期14天的饲养试验，测定仔猪的生长性能。试验期末，对试验猪进行前腔静脉采血，测定血浆常规生化指标、免疫指标和抗氧化指标。结果表明：断奶仔猪日粮中添加复方A免疫增强剂显著提高了仔猪的日增重（ADG），降低料重比（F/G）；显著提高血浆γ-谷氨酰转肽酶（GGT）和一氧化氮合酶活性（NOS）以及血浆中免疫球蛋白（IgG）水平；显著降低了血浆丙二醛（MDA）的含量。 试验三复合免疫增强剂对断奶仔猪免疫指标、血浆激素及炎性细胞因子水平和常规生化指标的影响为了研究复方A 免疫增强剂对断奶仔猪免疫指标、血浆激素及炎性细胞因子水平和常规生化指标的影响，试验选用来源一致、健康的平均体重为6.51±0.19kg、平均年龄为23±3d 的杜洛克×长白×大白断奶仔猪16 头，按体重随机分为2 个日粮处理，每个处理4 个重复（栏），每个重复（栏）2 头仔猪。 两个日粮处理组分别为对照组（基础日粮，不含抗生素）和试验组（基础日粮+0.05％复方A 免疫增强剂）。用两种日粮饲喂仔猪，进行为期27d 的饲养试验。 试验第14d，从前腔静脉采血测定血浆激素及炎性细胞因子水平、外周血淋巴细胞转化率等，同时对所有试验猪只每千克体重耳后肌肉注射牛血清白蛋白（BSA）1mg，于注射后第7d 采血测定血清BSA 抗体水平。试验第21d 在仔猪左腿内侧距最后乳头5cm 及距腹中线5cm处皮下注射植物血球凝集素（PHA）进行皮肤过敏试验。结果表明：断奶仔猪日粮中添加复方A 免疫增强剂提高了植物血球凝集素（PHA）刺激的皮褶厚度增加值；降低了血浆生长抑素（SS）和胰高血糖素（PG）水平以及乳酸脱氢酶（LDH）的活性。 试验四复合免疫增强剂对LPS 应激断奶仔猪生长性能、血浆激素及炎性细胞因子水平和免疫指标的影响试验选用来源一致、健康的平均体重为6.51±0.19kg、平均年龄为23±3d 的杜洛克×长白×大白断奶仔猪16 头，按体重随机分为2 个日粮处理，每个处理4个重复（栏），每个重复（栏）2 头仔猪。两个日粮处理组分别为对照组（基础日粮，不含抗生素）和试验组（基础日粮+0.05％复方A 免疫增强剂）。分别用两种日粮饲喂仔猪，进行了为期27d 的饲养试验。试验第23d 对所有试验猪只腹膜注射100μg/kgBW 的LPS，注射后3h，前腔静脉采血，分离血浆测定血浆激素水平及炎性细胞因子水平和免疫指标。结果表明：复方A 免疫增强剂显著降低了仔猪血浆白细胞介素-6（IL-6）和胰岛素（Ins）水平，促进了生长抑素（SS）的分泌，同时提高了血浆白细胞介素-2（IL-2）水平，而对LPS 应激前后仔猪的生长性能无显著影响。 以上结果表明：复方A 免疫增强剂具有提高仔猪生长性能、增进免疫功能及抗免疫应激的作用。