沉默乙酰肝素酶对胃癌侵袭转移影响的体外研究
目的：采用RNA干扰技术探讨沉默乙酰肝素酶(heparanase HPa)对人胃癌细胞株SGC-7901转移和移动能力的影响。 方法：根据人HPa基因序列设计4个小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)靶位点(HPal521、HPal324、HPal085、HPal111)，并构建了4个针对靶位点的一个载体编码一个短发夹状RNA(shRNA)质粒表达载体，同时合成了1个阴性对照质粒表达载体(shNC)和1个阳性对照质粒表达载体(shhGAPDH)，采用脂质体介导转染人胃癌细胞株SGC-7901，用Western-blot和RT-PCR检测转染前后乙酰肝素酶蛋白和mRNA表达的变化，选出对乙酰肝素酶抑制效果最显著的质粒作为研究对象，利用其转染细胞SGC-7901，并用G418筛选稳定转染的细胞，扩增培养，应用Transwell小室侵袭试验和划痕损伤实验分别研究转染前后细胞SGC-7901侵袭、转移能力的变化。 结果：脂质体介导质粒HPal521、HPal324、HPal085、HPal111转染细胞后，转染后细胞乙酰肝素酶mRNA的表达量(HPa mRNA光密度值与相应内参之比)分别为0.83±0.03、0.78±0.05、0.36±0.01、0.67±0.04，乙酰肝素酶蛋白表达量(HPa蛋白表达光密度值与相应内参之比)分别为0.87±0.01、0.76±0.03、0.38±0.01、0.69±0.03。质粒HPal085对乙酰肝素酶的抑制作用较其它质粒显著，质粒HPal085转染SGC7901细胞后并用G418筛选后，在Transwell小室侵袭试验中，转染组与正常对照组侵袭的细胞数分别为44±15.22和289.9±18.11，转染组侵袭细胞数较正常对照组显著减少(P＜0.05)；在划痕损伤实验中，转染组细胞48h后向划痕内迁移的距离较对照组显著减慢(P＜0.05)。 结论：沉默乙酰肝素酶可以通过下调乙酰肝素酶mRNA和蛋白的表达而抑制细胞SGC-7901的移动、侵袭能力。HPal085可能成为治疗胃癌的新靶点。
- 作者：
- 王拴柱
- 学位授予单位：
- 内蒙古医学院
- 专业名称：
- 人体解剖与组织胚胎学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2009年
- 导师姓名：
- 赵若雷；刘明
- 中图分类号：
- R735.2
- 关键词：
- 胃癌；乙酰肝素酶；RNA干扰；SGC-7901细胞
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