异位酸对山羊瘤胃微生物区系的影响
Effects of Isoacids on Rumen Microflora of Goat
本试验在人工瘤胃体外培养的基础上,采用半定量PCR和PCR-SSCP技术,研究了2-甲基丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸和复合异位酸对山羊瘤胃微生物区系的影响;在添加复合异位酸条件下,研究了不同水平非蛋白氮(NPN)对山羊瘤胃微生物区系的影响;通过在山羊日粮中添加0.2%的复合异位酸,研究了复合异位酸对山羊瘤胃微生物区系的影响.在本试验条件下,试验结果如下:1)体外培养条件下,单体异位酸和复合异位酸对瘤胃微生物区系的影响采用单因子试验设计,分5个处理,每个处理3个重复,复合异位酸添加水平为0.2%,体外连续培养24h,收集培养液,提取微生物DNA,以瘤胃微生物总DNA为内参,进行相对定量PCR;采用PCR-SSCP技术分析细菌V3区.结果表明,各瘤胃细菌表达量的变化趋势各组之间规律不统一,复合异位酸对3种纤维分解菌的总体效果均高于其它单体异位酸,但差异均不显著(P0.05),而对2种淀粉分解菌的总体效果都低于各单体异位酸,差异不显著(P0.05).SSCP分析显示添加4种单体异位酸和复合异位酸,各组的瘤胃细菌优势条带存在一定的差异,各组都具有其各自的优势菌群,且复合异位酸组的条带数最多.2)添加复合异位酸条件下,不同水平非蛋白氮(NPN)对瘤胃微生物区系的影响试验利用体外产气法,采用单因子试验设计,非蛋白氮设置5个添加水平,分别为0(对照组)、0.3%、0.6%、0.9%、1.2%,每个水平设2个重复,复合异位酸添加水平为0.2%,体外连续培养24h,收集培养液,提取微生物DNA,以瘤胃微生物总DNA为内参,进行相对定量PCR;采用PCR-SSCP技术分析细菌V3区.结果表明,在添加复合异位酸的条件下,综合考虑5种瘤胃细菌表达量,1.2%NPN组的效果最好.SSCP图谱显示,对照组、0.3%NPN组、0.6%NPN组和0.9%NPN组之间,SSCP图谱相似性较高,1.2%NPN组的细菌条带明显增多,说明该组瘤胃细菌多样性更复杂.3)复合异位酸对山羊瘤胃微生物区系的影响试验分为两个阶段,为对照期和试验期.对照期饲喂基础日粮,试验期饲喂基础日粮补饲复合异位酸,试验期前设2周预试期.瘤胃内容物样品均采集于上午9点(饲喂后2h),在试验期的第7天和14天经瘘管收集瘤胃液.提取微生物DNA,以瘤胃微生物总DNA为内参,进行相对定量PCR;采用PCR-SSCP技术分析细菌V3区.结果表明,5种瘤胃细菌的表达量都随着复合异位酸添加时间的延长而上升.SSCP图谱显示,瘤胃细菌表现出复杂多样的区系变化,与对照期相比,随着添加复合异位酸时间的延长,SSCP图谱条带数明显增加,第14天条带数最多.
- 作者：
- 程桂英
- 学位授予单位：
- 武汉工业学院
- 专业名称：
- 动物营养与饲料科学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2009年
- 导师姓名：
- 赵胜军；王春维
- 中图分类号：
- S827
- 关键词：
- 异位酸；瘤胃细菌；半定量PCR；PCR-SSCP；山羊
- Isoacids；Rumen bacteria；Semi-quantitative PCR；PCR-SSCP(Polymerase Chain Reaction- Single Strand Conformation Polymorphism)；Goat